موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:38 دقيقة • July 8th, 2025
البروتينات المرتبطة بالحمض النووي الريبي النووي ، RBPs ، هي بروتينات متعددة الوظائف تتكون من مناطق مرتبة ذات بنية ثلاثية الأبعاد محددة جيدا ومناطق أقل استقرارا ومضطربة جوهريا ، IDRs.
في العديد من الأمراض التنكسية العصبية ، تتسبب الطفرات الخاصة ب IDR في تغيير RBPs بشكل خاطئ في السيتوبلازم ، والانخراط بشكل شاذ في تفاعلات ضعيفة ، وتشكيل شوائب ديناميكية خالية من الغشاء - وهي ظاهرة تسمى فصل الطور. في النهاية ، تنضج هذه الشوائب إلى مجاميع سامة غير قابلة للذوبان ، مما يؤدي إلى خلل وظيفي وتنكس الخلايا العصبية.
للتحقيق في فصل طور RBP في الجسم الحي باستخدام علم البصريات الوراثي ، ابدأ بيرقة سمكة الزرد المعدلة وراثيا مخدرة ومنزوعة التكاثر ، تعبر عن RBP متحولة IDR مدمجة مع مراسل فلورسنت ومجال مستقبلات ضوئية حساسة للضوء الأزرق ، في مخزن مؤقت مناسب.
بعد ذلك ، قم بتركيب اليرقة بشكل جانبي على قطرة الاغاروز المنصهرة لتصوير الحبل الشوكي. اسمح للagarose بالتصلب ، مما يؤدي إلى شل حركة اليرقة. باستخدام المجهر متحد البؤر ، احصل على صور الحبل الشوكي لتصور RBPs الفلورية ، الموضعية داخل النوى العصبية.
الآن ، قم بإزالة اليرقة من الاغاروز وانقلها إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على عازلة. ضع اللوحة على لوحة الصمام الثنائي الأزرق المسنة الباعثة للضوء وقم بإضاءة اليرقة.
عند التعرض للضوء الأزرق ، تخطئ RBPs الطافر
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية