JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 3:48 د • July 8th, 2025
الديدان الخيطية الطفيلية النباتية مثل Ditylenchus dipsaci هي ديدان مجهرية. تظهر الديدان الحية حركات جيبية من خلال تقلصات العضلات ، وحركتها محدد مهم لصحتها في ظروف الاستزراع.
يمكنأن يتداخل التعرض لمبيدات النيماتودا - المواد السامة الكيميائية ، مع العمليات البيولوجية الرئيسية ، مما يؤثر على حركة هذه الديدان الخيطية المستزرعة ، مما يؤدي إلى وفاتها.
لفحص مبيدات النيماتودا ذات الجزيئات الصغيرة ، خذ صفيحة تحتوي على الماء المقطر ومتعددة الآبار. باستخدام أداة تثبيت نظيفة ، انقل مبيدات النيماتودا الجزيئية الصغيرة المحتملة من لوحة المخزون الكيميائي إلى لوحة الفحص لضمان نقل كميات ثابتة من الجزيئات إلى كل بئر.
قم بتوزيع عدد متساو من الديدان الخيطية على كل بئر من اللوحة. أغلق الألواح مع الحفاظ على الظروف الرطبة لدعم بقاء الديدان الخيطية وقدرتها على الحركة. احتضان اللوحة بتحريض خفيف لمنع الديدان من الاستقرار.
أثناء الحضانة ، تعمل الجزيئات الصغيرة السامة المختلفة على الديدان وتقتلها ، في حين أن الجزيئات غير السامة ليس لها أي تأثير. راقب اللوحة تحت مجهر تشريح لتحديد الآبار التي بها دودة غير متحركة.
استكمل لوحات الفحص بمحلول هيدروكسيد الصوديوم - منبه كيميائي في نهاية المطاف. يؤدي هذا إلى حركة أي ديدان مستريحة ويميزها عن الديدان الميتة.
يؤكد وجود الديدان غير المتحركة بعد المعالجة بهيدروكسيد الصوديوم في بعض الآبار فعالية الجزيئات الصغيرة المقابلة كمبيدات النيماتودا.
لتحضير ألواح الفحص ، صب الماء المقطر المعقم في حوض معقم ، وقم بتوزيع 40 ميكرولترا من الماء المقطر من الحوض الصغير في كل بئر من صفيحة مسطحة القاع مكونة من 96 بئرا مع ماصة متعددة القنوات. أضف مواد كيميائية من ألواح المخزون الكيميائية المكونة من 96 بئرا إلى ألواح الفحص ، عن طريق التثبيت ثلاث مرات في الصفيحة الكيميائية. ثم انقل المسامير 10 مرات إلى لوحة الفحص. امسح على الورق أمام محلول التنظيف.
لحساب عدد الديدان الخيطية من المجموعة ، أولا ، قم بتعليق المجموعة ، ثم قم بتعليق 5 ميكرولترات من المحلول باستخدام أطراف منخفضة الاحتفاظ على شريحة. احسب عدد الديدان الخيطية في 5 ميكرولتر باستخدام مجهر التشريح. ثم اضبط التركيز على ديدتين لكل ميكرولتر باستخدام ماء مقطر معقم.
بعد ذلك ، أضف 10 ميكرولترات من العينة إلى كل بئر من الألواح المكونة من 96 بئرا باستخدام ماصة متعددة القنوات وحوض صغير. لف الأطباق بمنشفة ورقية مبللة وضعها في صندوق. بعد ذلك ، أضف منشفة ورقية مبللة إضافية لتثبيت الألواح وضمان الحد الأدنى من حركة الألواح ، وقم بتثبيتها على وسادة لاصقة في حاضنة اهتزاز 20 درجة مئوية مضبوطة على 200 دورة في الدقيقة.
راقب اللوحات في اليوم 5 تحت مجهر تشريح. احسب عدد D. dipsaci المتنقل والإجمالي في أدوات التحكم في مذيبات DMSO والآبار المعالجة بالأدوية.
إذا كانت الديدان غير متحركة ، أضف 2 ميكرولتر من 1 هيدروكسيد الصوديوم المولي إلى تركيز نهائي يبلغ 40 ملليمولار إلى البئر لتحفيز الحركة. احسب نسبة الديدان المتنقلة. في D. dipsaci الشاشات ، يتم تصنيف الآبار التي أنتجت 0٪ من الديدان المتنقلة بشكل متكرر على أنها ضربات قوية.
تبحث هذه الدراسة في تأثيرات مبيدات النيماتودا ذات الجزيئات الصغيرة على حركة النيماتودا المتطفلة على النبات Ditylenchus dipsaci. تتضمن المنهجية فحص مبيدات النيماتودا المحتملة وتقييم تأثيرها على حركة النيماتودا وقدرتها على البقاء.
تتيح اختبارات الفرز متوسطة الإنتاجية للمبيدات النيماتودية ذات الجزيئات الصغيرة ضد Ditylenchus dipsaci تقييماً كمياً لفعالية المركبات في تعطيل حركة النيماتودا. يدعم سير العمل هذا التحقق من الأهداف في المراحل المبكرة وتقليل المخاطر الميكانيكية لمحافظ اكتشاف الكيماويات الزراعية. كما أن التمييز الموثوق بين النيماتودا الحية والميتة والساكنة يعزز الثقة التنبؤية في تحديد المركبات الواعدة وعمليات الفرز اللاحقة.
يقع هذا الاختبار ضمن النطاق الممتد من مرحلة الاكتشاف المبكر إلى تحديد المركبات الرائدة، مما يوفر منصة موحدة لفحص وفرز مبيدات النيماتودا ذات الجزيئات الصغيرة.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026