فحص التمعدن في المختبر: طريقة لقياس الألوان لتحديد رواسب الكالسيوم في الأرودة العظمية على بديل الكسب غير المشروع للعظام عن طريق تلطيخ واستخراج Alizarin Red S

0 مشاهدات3:57 د • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أثناء تجديد العظام ، يتم تجنيد بانيات العظم - الخلايا المكونة للعظام - في الموقع المكسور ، حيث تتكاثر وتفرز العظم - مصفوفة كولاجينية. بعد فترة النضج ، تقوم بانيات العظم بتمعدن العظم عن طريق الترسب المنظم لأيونات الكالسيوم والفوسفات ، مما يؤدي إلى تخليق عظام جديد.

لتحديد درجة تمعدن بانيات العظم في المختبر ، احصل على تعليق بانيات العظم الأولي في الوسائط المناسبة. قم بزرع المعلق في صفيحة متعددة الآبار تحتوي على أقراص بديلة مسامية للطعم العظمي واحتضنها.

تعمل

الأقراص كسقالة ، مما يسمح بالتصاق الخلايا وتكاثرها.

استبدل الوسائط المستهلكة بوسائط جديدة تحتوي على مكملات العظم. احتضان لفترة طويلة. تحفز المكملات العظمية بانيات العظم على إنتاج المصفوفة الكولاجينية ثم تمعدنها.

بعد التثبيت ، قم بتلطيخ المصفوفة المعدنية بمحلول أليزارين أحمر S ، ARS. ARS ، وهي صبغة سالبة الشحنة ، ترتبط بأيونات الكالسيوم موجبة الشحنة في المصفوفة ، وتشكل مركبا أحمر اللون. إزالة البقعة الزائدة. قم بتصوير اللوحة للكشف عن رواسب الكالسيوم الحمراء ، مما يوحي بتمعدن بانيات العظم.

بعد ذلك ، أضف محلول كلوريد سيتيل بيريدينيوم ، CPC. CPC ، وهو مادة خافضة للتوتر السطحي موجبة الشحنة ، في شكل ميسيلار ، تعقد عبر مجموعات رأسها مع ARS مشحونة بشكل معاكس مرتبطة بأيونات الكالسيوم في المصفوفة ، مما يسهل استخراج الصبغة في المحلول.

اجمع الحل وطرد المركزي. انقل المادة الطافية التي تحتوي على مجمعات صبغة CPC إلى صفيحة متعددة الآبار وقم بقياس الامتصاص باستخدام قارئ صفيحة دقيقة.

يشير

امتصاص مجمعات صبغة CPC إلى كمية رواسب الكالسيوم في المصفوفة ، وهو تقدير لدرجة تمعدن بانيات العظم.

انقل أقراص فوسفات بيتا ثلاثي الكالسيوم الملطخة إلى بئر جديد ، وامسح الألواح باستخدام ماسح ضوئي مسطح لتسجيل التمعدن.

بعد التقاط الصورة ، أضف 250 ميكرولترا من محلول كلوريد سيتيل بيريدينيوم بنسبة 10٪ ورجه لمدة 15 دقيقة لاستخراج صبغة Alizarin red S بعد ذلك ، انقل المحلول من الآبار إلى أنابيب فردية سعة 1.5 مليلتر ، وأجهزة الطرد المركزي عند 17,000 مرة جم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.

تمييع المستخلص بمحلول كلوريد سيتيل بيريدينيوم بنسبة 10٪ بنسبة تخفيف من 1:10 إلى 1:20 في أنبوب سعة 1.5 ملليلتر. بعد ذلك ، انقل 300 ميكرولتر من كل عينة مخففة إلى آبار الصفيحة المكونة من 96 بئرا. قم بتضمين بئرين فارغين يحتويان على 10٪ فقط من كلوريد سيتيل بيريدينيوم.

بعد ذلك ، قم بإعداد سبعة معايير مرجعية من Alizarin red S تتراوح من 4 إلى 400 ميكرومولار عن طريق تخفيف محلول تلطيخ أليزارين الأحمر S بمقدار 40 ملليمولار بمحلول كلوريد سيتيل بيريدينيوم بنسبة 10٪ لإنشاء منحنى قياسي.

قم بتحميل 300 ميكرولتر من كل معيار في اللوحة. أخيرا ، اقرأ امتصاص العينات والفراغات والمعايير المرجعية عند 520 نانومتر.

08:34

Bioprinting Cellularized التركيبات باستخدام الأنسجة محددة هيدروجيل Bioink

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:27

مجمع متضاعف الكتروليتي للهيبارين ربط تسليم عظمية عامل نمو المجال

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:41

تحضير مزيج سريع من Bioinspired النانو هيدروكسيباتيت للتطبيقات الطبية الحيوية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:37

تلطيخ أليزارين الأحمر: تقنية لتصور التمعدن بواسطة بانيات العظم المستنبتة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:46

فحص حفرة الارتشاف: تقنية في المختبر لتحديد نشاط ارتشاف الكالسيوم لناقضات العظام الناضجة باستخدام ألواح الاستزراع المطلية بفوسفات الكالسيوم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:13

تطبيق حمض الريتينويك الحصول الثقافات Osteocytes من الابتدائية ماوس خلايا الأوستيوبلاستس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:17

ناقضة العظم اشتقاق من الفأر نخاع العظم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:17

الفئران هند الاطراف طويل العظام تشريح ونخاع العظم عزل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:51

أساليب لتحليل آثار اليورانيوم الطبيعي في أوستيوكلاستوجينيسيس في المختبر

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:28

الشخصية التوافق البيولوجي في الحيوية لتجديد العظام

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 1 أغسطس 2026