فحص التمعدن في المختبر: طريقة لقياس الألوان لتحديد رواسب الكالسيوم في الأرودة العظمية على بديل الكسب غير المشروع للعظام عن طريق تلطيخ واستخراج Alizarin Red S
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:57 دقيقة • July 8th, 2025
أثناء تجديد العظام ، يتم تجنيد بانيات العظم - الخلايا المكونة للعظام - في الموقع المكسور ، حيث تتكاثر وتفرز العظم - مصفوفة كولاجينية. بعد فترة النضج ، تقوم بانيات العظم بتمعدن العظم عن طريق الترسب المنظم لأيونات الكالسيوم والفوسفات ، مما يؤدي إلى تخليق عظام جديد.
لتحديد درجة تمعدن بانيات العظم في المختبر ، احصل على تعليق بانيات العظم الأولي في الوسائط المناسبة. قم بزرع المعلق في صفيحة متعددة الآبار تحتوي على أقراص بديلة مسامية للطعم العظمي واحتضنها.
تعملالأقراص كسقالة ، مما يسمح بالتصاق الخلايا وتكاثرها.
استبدل الوسائط المستهلكة بوسائط جديدة تحتوي على مكملات العظم. احتضان لفترة طويلة. تحفز المكملات العظمية بانيات العظم على إنتاج المصفوفة الكولاجينية ثم تمعدنها.
بعد التثبيت ، قم بتلطيخ المصفوفة المعدنية بمحلول أليزارين أحمر S ، ARS. ARS ، وهي صبغة سالبة الشحنة ، ترتبط بأيونات الكالسيوم موجبة الشحنة في المصفوفة ، وتشكل مركبا أحمر اللون. إزالة البقعة الزائدة. قم بتصوير اللوحة للكشف عن رواسب الكالسيوم الحمراء ، مما يوحي بتمعدن بانيات العظم.
بعد ذلك ، أضف محلول كلوريد سيتيل بيريدينيوم ، CPC. CPC ، وهو مادة خافضة للتوتر السطحي موجبة الشحنة ، في شكل ميسيلار ، تعقد عبر مجموعات رأسها مع ARS مشحونة بشكل معاكس مرتبطة بأيونات الكالسيوم في المصفوفة ، مما يسهل استخراج الصبغة في المحلول.
اجمع ال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية