موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:55 دقيقة • July 8th, 2025
لتقييم إمكانات مركب اختبار مبيد لليرقات ، يبدأ مضاد مستقبلات الدوبامين ، باستخدام مقايسة ملامسة اليرقات ، مع يرقات البعوض الحية في مرحلة النمو أو الطور المرغوبة في الوسط المائي. انقل أعدادا متساوية من اليرقات إلى آبار صفيحة متعددة الآبار.
استبدل الوسائط الموجودة في الآبار بالمياه منزوعة الأيونات لمنع أي تداخل من الملوثات التي قد تؤثر سلبا على اليرقات. أضف تركيزات متزايدة من مركب الاختبار إلى الآبار المعنية.
قم بتدوير اللوحة برفق لتسهيل التلامس بين اليرقات ومركب الاختبار. احتضان اللوحة في ظل الظروف المناسبة.
عند ملامسة اليرقات ، يدخل مركب الاختبار إلى جدار الجسم أو الطبقة الخارجية ويصل إلى الفتحات التنفسية ، وفتحات نظام القصبة الهوائية ، والتي ترتبط بالعقد - مجموعة من الخلايا العصبية - التي تضم الجهاز العصبي المركزي.
على الخلايا العصبية ، يرتبط مركب الاختبار بمواقع الربط الثانوية لمستقبلات الدوبامين ، والتي تشارك في العمليات الخلوية الحرجة. هذا الربط ، حتى مع ارتباط الدوبامين العصبي بمستقبلات الدوبامين ، يمنع تنشيط المستقبلات والإشارات النهائية ، مما يعطل نمو اليرقات ، مما يؤدي في النهاية إلى الوفاة.
سجل عدد اليرقات غير المستجيبة ، التي تفتقر إلى الحركة ، في كل بئر في نقطة زمنية محددة بعد التعرض لمركب الاختبار عبر تركيزات مركبة مختلفة.
وتشير زيادة معدل وفيات اليرقات مع زيادة التركيز إلى إمكانات مبيد اليرقات لمركب الاختبار.
للبدء ، قم بتسمية آبار لوحة زراعة الأنسجة الشفافة المكونة من 24 بئرا. استخدم ميزان تحليليا لوزن مركب الاختبار. بعد ذلك ، قم بإذابة المركب في ماء معقم مزدوج المقطر في أنبوب سعة 1.5 مليلتر ، مما ينتج عنه محلول مخزون سعة 80 ملليمول. بعد ذلك ، قم بتخفيف محلول المرق بشكل متسلسل باستخدام الماء المقطر المزدوج لإعداد محاليل مخزون العمل بالتركيزات المطلوبة.
لاحظ أنه يجب توخي الحذر عند إضافة اليرقات إلى الآبار ، وأثناء إزالة المياه الزائدة ، وعند إضافة كيمياء الاختبار ، لتجنب التلف المادي لليرقات. قد تزيد الإصابة من معدل الوفيات ، وبالتالي تؤدي إلى نتائج إيجابية خاطئة أو تبطل الفحص.
استخدم ماصة نقل بلاستيكية واسعة التجويف لنقل خمس يرقات من الطور الثالث إلى كل بئر من اللوحة. بعد ذلك، استخدم ماصة سعة 1 مليلتر لإزالة الماء برفق، واستبدله بالحجم المطلوب من الماء المقطر المزدوج.
احرص على عدم لمس اليرقات عند إزالة الماء. اعمل بسرعة لضمان عدم جفاف اليرقات ، وأضف كيمياء الاختبار برفق عن طريق سحب العينات على الجانب الآخر من البئر البلاستيكي.
أضف حجما مناسبا من محلول الاختبار لكل بئر ، وقم بتدوير اللوحة برفق لضمان خلط موحد. ضع اللوحة في غرفة النمو ، مع الحفاظ على دورة الضوء والظلام لمدة 12 ساعة عند 25 درجة مئوية مع رطوبة نسبية تتراوح من 75٪ إلى 85٪.
للتحقق من حركة اليرقات ، اضغط برفق على اللوحة. إذا لم يلاحظ أي حركة ، فالمس اليرقة برفق باستخدام عود أسنان معقم. قم بتسجيل اليرقة على أنها ميتة إذا لم يتم ملاحظة أي استجابة ، واستخدم ورقة النتائج لتسجيل العدد الإجمالي لليرقات الميتة في كل بئر في النقاط الزمنية الموضحة في بروتوكول النص.