موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:56 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ مقايسة تغذية البعوض عن طريق تحضير وجبة دم ، وإضافة التركيز المطلوب لمركب الاختبار النشط في دم الأرانب منزوع الضرب. تفتقر وجبة الدم إلى الفيبرين ، مما يمنع تخثر الدم.
قم بتحميل وجبة الدم هذه في منفذ توصيل وحدة التغذية الغشائية. قم بتوصيله بوحدة تسخين ، مع الحفاظ على الدم عند درجة الحرارة المثلى. قم بتغطية الغشاء بمحلول حمض اللاكتيك.
ضع هذه الوحدة في قفص به إناث البعوض البالغة الجائعة مسبقا لزيادة فرص التغذية. احتضن في الظلام. يجذب حمض اللاكتيك البعوض نحو وحدة التغذية. تشجعهم الظروف المظلمة على التغذية.
انقل البعوض الذي يتغذى على الدم إلى غرفة النمو. بعد هضم وجبة الدم ، يدخل مركب الاختبار النشط إلى جسم البعوض ، مما يؤثر على الأعضاء المختلفة ويتسبب في موت بعضها.
احسب عدد البعوض الميت واحسب معدل الوفيات. تقييم تأثير مادة الاختبار الكيميائية على الجهاز التناسلي للبعوض الباقي على قيد الحياة عن طريق إدخال كوب بيض في الغرفة.
تستخدم إناث البعوض البروتينات من وجبة الدم وتضع البيض ، والتي يتم جمعها داخل الكوب. عد عدد البيض ، وتقدير الانخفاض في الخصوبة - القدرة على وضع البيض.
يتوافق معدل الوفيات المرتفع والخصوبة المنخفضة مع قدرة المركب على المبيدات الحشرية.
اجمع ما يقرب من 150 من أنثى البعوض البالغة التي تتراوح أعمارها بين أربعة وخمسة أيام باستخدام شفاطة ، وانقلها إلى قفص منفصل. قم بإزالة مصدر السكر قبل 1 إلى 24 ساعة من فحص التغذية.
تحضير محلول مخزون 80 مليمولار لمركب الاختبار في الماء. ثم قم بتخفيفه بشكل متسلسل بالماء للحصول على محاليل مخزون العمل بالتركيزات المطلوبة.
للحصول على تركيزات الاختبار المطلوبة ، أضف 40 ميكرولترا من كل تخفيف إلى 960 ميكرولترا من دم الأرانب منزوع الرجفان في أنبوب سعة 1.5 مليلتر ، واخلطه عن طريق سحب العينات. ضع مرشحا غشائيا على وحدة التغذية ، وأغلقه بحلقة مطاطية.
بعد ذلك ، استخدم ماصة لنقل 1 مليلتر من الدم بمحلول الاختبار من خلال منفذ التوصيل الموجود على الجانب الخلفي من وحدة التغذية. قم بتوصيل وحدة التغذية بوحدة تسخين. ثم امسح سطح الغشاء برفق باستخدام محلول حمض اللاكتيك 10٪ المحضر حديثا.
ضع وحدة التغذية في القفص. قم بتغطية القفص بقطعة قماش داكنة ، واترك البعوض يتغذى لمدة ساعة واحدة. بعد أن يتغذى البعوض ، ضع القفص في الثلاجة على حرارة 4 درجات مئوية لمدة خمس دقائق لتخدير البعوض. ثم قم بحساب وتسجيل العدد الإجمالي للبعوض في القفص.
من خلال فحص البطن ، قم بحساب وتسجيل العدد الإجمالي لإناث البعوض التي تتغذى بشكل كامل وجزئي. وينبغي الحصول على ما لا يقل عن 50 بعوضا يتغذى بالدم لكل جرعة. قم بإزالة أي بعوض لم يتغذى. بعد ذلك ، انقل القفص إلى غرفة النمو واستخدم ورقة النتائج لتسجيل عدد البعوض الميت في النقاط الزمنية المناسبة.
في اليوم 3 بعد الرضاعة بالدم ، ضع كوب بيضة في القفص لمدة 72 ساعة. استخدم مجهر تشريح لحساب العدد الإجمالي للبويضات المنتجة لكل علاج.