مقايسة استنفاد الجلوكوز في المختبر: طريقة قائمة على التألق لتحديد كمية امتصاص الجلوكوز الخلوي عن طريق قياس استنفاد الجلوكوز خارج الخلية
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 5:52 دقيقة • July 8th, 2025
يدخل الجلوكوز ، وهو مصدر أساسي للطاقة الخلوية ، إلى الخلايا عبر بروتينات ناقل الجلوكوز في غشاء الخلية. يتم تكسير الجلوكوز في سيتوبلازم الخلية للبيروفات ، عبر مسار تحلل السكر ، مما يولد الطاقة من خلال أدينوسين ثلاثي الفوسفات ، أو ATP ، لعملية التمثيل الغذائي الخلوي.
لقياس امتصاص الجلوكوز داخل الخلايا ، ابدأ بثقافة ملتصقة من الخلايا الليفية في صفيحة متعددة الآبار. استبدل الوسائط بوسائط خالية من الجلوكوز واحتضنها. تقوم الخلايا باستقلاب الجلوكوز المتاح لإنتاج الطاقة ، والوصول إلى حالة متعطشة للجلوكوز.
استبدل الوسائط الموجودة في مجموعة واحدة من الآبار بوسائط خالية من الجلوكوز تحتوي على الأنسولين ، ومحفز امتصاص الجلوكوز ، وديوكسي جلوكوز الفلورسنت ، وهو نظير للجلوكوز. عالج مجموعة أخرى من الآبار بوسائط خالية من الجلوكوز تحتوي على ديوكسي جلوكوز الفلورسنت.
أثناء الحضانة ، يحفز الأنسولين نقل ناقلات الجلوكوز الإضافية إلى غشاء البلازما ، مما يسهل زيادة امتصاص ديوكسي جلوكوز الفلورسنت ، في حالة عدم وجود الجلوكوز.
يتم فسفرة ديوكسي جلوكوز ولا يتم استقلابه بواسطة الخلايا. في الوقت نفسه ، ينخفض تركيز جلوكوز الديوكسي الفلوري خارج الخلية.
بعد الحضانة ، اجمع الوسائط التي تحتوي على ديوكسي جلوكوز الفلورسنت غير المستخدم. عالج الخلايا بمحلول تحلل. يشكل المنظف الموجود في المخزن المؤقت مذيلات ويذوب الأغشية ال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية