قياس الاستنفاد التناظري للجلوكوز الفلوري خارج الخلية: تقنية قياس بديلة لتقييم امتصاص الجلوكوز في أعضاء الفئران خارج الجسم الحي

في الأنسجة ، يدخل الجلوكوز خارج الخلية إلى الخلايا عن طريق الانتشار الميسر من خلال ناقلات الجلوكوز المحددة.

يتم تكسير الجلوكوز إلى بيروفات في سيتوبلازم الخلية عن طريق تحلل السكر ، وهو مسار استقلابي ، يولد الطاقة في شكل أدينوسين ثلاثي الفوسفات ، أو ATP ، لعمليات التمثيل الغذائي الخلوية.

لقياس امتصاص الجلوكوز من الجسم الحي، ابدأ بأنسجة كبد الفأر الصغيرة الحجم التي تم حصادها حديثا. أضف عازلة مناسبة للحفاظ على الظروف الفسيولوجية.

بعد ذلك ، انقل الأنسجة إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسائط خالية من الجلوكوز. اتبعه عن طريق الحضانة في وسائط خالية من الجلوكوز مكملة ب deoxyglucose ، وهو نظير جلوكوز يحمل علامة الفلورسنت. يسمح الحجم الصغير للأنسجة بدخول ديوكسي جلوكوز.

يدخل ديوكسي جلوكوز إلى الخلايا من خلال ناقلات الجلوكوز ، في حالة عدم وجود الجلوكوز. داخل الخلايا ، يخضع ديوكسي جلوكوز للفسفرة ولكن لا يتم استقلابه أكثر ، مما يؤدي إلى تراكمه.

اجمع الوسائط التي تحتوي على ديوكسي جلوكوز غير مستخدم ومصنف بالفلورسنت في النقاط الزمنية المطلوبة. باستخدام قارئ صفيحة دقيقة ، قم بقياس تألق ديوكسي جلوكوز خارج الخلية ، والذي يمكن ربطه بامتصاص الأنسجة داخل الخلايا لديوكسي جلوكوز.

احتضان الأنسجة أو الأعضاء المحصودة في صفيحة من 6 آبار تحتوي على PBS لمدة دقيقة واحدة. تعامل مع كل نسيج أو عضو في بئر منفصل. بعد