موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:45 دقيقة • July 8th, 2025
جدار الشريان الأورطي في الغالب على خلايا عضلية ملساء، أو SMCs، تحتوي على آلية بروتين مقلصة تنقبض وتسترخي لتنظيم تدفق الدم الأبهري.
لقياس الاستجابة الانقباضية ل SMCs الأبهري في المختبر ، احصل على صفيحة متعددة الآبار تحتوي على مجموعة استشعار مقاومة ركيزة الخلية الكهربائية ، أو ECIS. تحتوي كل مجموعة على أقطاب كهربائية من الأغشية الذهبية في قاع البئر ، محددة بغشاء عازل. قم بتغطية الآبار بالجيلاتين.
تعليق SMC البشري الأولي في الآبار. انقل لوحة البئر المحتوية على ECIS إلى حامل لوحة متصل بمكبر للصوت ونظام الحصول على البيانات مع ضمان ملامسة القطب الكهربائي مع الحامل. قم بتطبيق تيار متناوب ثابت صغير بين الأقطاب الكهربائية لقياس الجهد عبرها.
أثناء الحضانة ، تلتصق SMCs وتنتشر على طلاء الجيلاتين. تتصرف الخلايا كعوازل ، مما يحد من تدفق التيار بين الأقطاب الكهربائية. مع ارتباط المزيد من الخلايا بالسطح ، ينخفض التدفق الحالي أكثر. نتيجة لذلك ، فإن المعاوقة أو المعارضة للتدفق الحالي وزيادة محتملة. في النهاية ، تتكاثر الخلايا على الأقطاب الكهربائية وتشكل طبقة أحادية.
عالج SMCs بأيونوفور الكالسيوم لتسهيل نقل أيونات الكالسيوم عبر أغشية الخلايا. ينشط تدفق أيونات الكالسيوم خارج الخلية الجهاز المقلص، مما يؤدي إلى الانكماش.
تنقبض SMCs المحفزة وتفقد الاتصال بالخلية الخلوية على الأقطاب الكهربائية. يؤدي الانخفاض الناتج في تغطية سطح القطب الكهربائي إلى تقليل المعاوقة ، مما يسهل القياس الكمي في الوقت الفعلي لتقلص SMC.
عد الخلايا باستخدام عداد الخلايا الآلي ، وقم بزرع SMCs ثلاث نسخ بكثافة بذر تبلغ 30,000 خلية لكل بئر ، في 200 ميكرولتر من وسط SMC في لوحة ECIS المطلية بالجيلاتين. ضع اللوحة مع SMCs في حامل ECIS 96-well في حاضنة زراعة الخلايا.
انقر نقرا مزدوجا فوق "برنامج ECIS Applied Biophysics software" لفتح البرنامج ، واضغط على زر "الإعداد". تحقق مما إذا كانت جميع الأقطاب الكهربائية على اتصال بالحامل ، في اللوحة السفلية اليسرى المسماة "تكوين البئر". إذا لم يتم توصيل الأقطاب الكهربائية بشكل صحيح ، فاضبط اللوحة في الحامل قبل بدء القياس.
الآن ، حدد نوع اللوحة في نفس اللوحة بالنقر فوق "نوع المصفوفة". بعد ذلك، قم بإعداد ماصتين بحجم 2 ميكرولتر و 150 ميكرولتر. قبل البدء في التحفيز ، اضغط على "علامة" في البرنامج ، ووضع تعليق.
لتحفيز الخلايا ، قم بإزالة الغطاء ، ووضعه على سطح معقم داخل الحاضنة. بعد ذلك ، قم بتحفيز تقلص SMC عن طريق سحب 2 ميكرولتر من محلول عمل الأيونومايسين في كل بئر في أسرع وقت ممكن.
بمجرد تحفيز جميع الخلايا ، امزج الوسط في الآبار باستخدام الماصة الثانية.