فحص خيوط الأكتين الانزلاقية: اختبار الحركة في المختبر لدراسة انتقال خيوط الأكتين على الميوسين المعطل

يتفاعل الميوسين - وهو بروتين حركي - مع بروتين خيطي آخر ، الأكتين ، مما يتسبب في انتقاله.

لتحليل حركة الانزلاق للأكتين ، قم بتجميع غرفة تدفق زجاجية قائمة على الشريحة بحيث يكون الجزء الداخلي من سطح الغرفة مغطى بالنيتروسليلوز. يتدفق في بروتينات الميوسين عبر الغرفة ، والتي تشل حركة فوق طلاء النيتروسليلوز.

استكمل الغرفة بخيوط الأكتين غير المسماة - الأكتينات السوداء - وأضف عازلة حركية تحتوي على جزيئات الأدينوسين ثلاثي الفوسفات أو ATP.

ترتبط خيوط الأكتين بالميوسين النشط الثابت جنبا إلى جنب مع الميوسين غير النشط أو الميت. تتفاعل جزيئات ATP مع الميوسين النشط ، مما يؤدي إلى تفكيكها عن الأكتينات السوداء بينما تظل الميوسين غير النشطة مرتبطة بالأكتين.

جهاز طرد مركزي لتكوير الميوسين غير النشط المرتبط بالأكتينات السوداء. اشطفها بمحلول عازل جيدا لإزالة حبيبات الميوسين غير النشطة ، وخيوط الأكتين الحرة ، و ATPs غير المستخدمة. التدفق في الأكتينات ذات العلامات الفلورية التي تربط الميوسين النشطة المجهولة.

استكمل الغرفة بمخزن مؤقت نهائي يحتوي على عامل ازدحام - ميثيل السليلوز و ATP. يجبر عامل الازدحام خيوط الفاعلة على البقاء أقرب إلى سطح الغرفة.

كل ميوسين نشط يحلل ATP مما يؤدي إلى تغيير توافقي وارتباط بموضع جديد على طول الفتيل ، مما يولد ضربة طاقة تنزلق الأكتين فوق الميوسين.

راقب الغرفة تحت المجهر الفلور