فحص الحركة المقلوبة: تقنية في المختبر لتصور حركة الميوسين على خيوط الأكتين المجمدة

الميوسين - بروتين حركي - له مجال رأس كروي يتفاعل مع الأكتين - وهو بروتين خيطي. هذا التفاعل ضروري لنقل الميوسين على طول خيوط الأكتين. لدراسة هذا الارتباط في المختبر ، قم بإجراء فحص الحركة المقلوب للميوسين فوق الأكتين المربوط على السطح.

للبدء ، قم بتجميع غرفة الفحص عن طريق وضع غطاء من البولي إيثيلين جلايكول الحيوي - PEG المطلي فوق شريحة مجهرية بحيث يواجه السطح المطلي الداخل ، مما يؤدي إلى إنشاء الجزء العلوي من الغرفة.

مرر محلول يحتوي على أفيدين - بروتين سكري - عبر الغرفة. يرتبط Avidin بالبيوتين مع تقارب عال ، مما يعزز التصاق الأكتين. بعد ذلك ، تتدفق في خيوط الأكتين الموسومة بالبيوتين المسمى بالفلوروفور الأحمر. يرتبط رابط البيوتين ب avidin ، مما يؤدي إلى تثبيت الخيوط الموجودة على سطح الغطاء.

أخيرا ، أضف بروتينات الميوسين 5A المسماة ببروتين الفلورسنت الأخضر في مخزن مؤقت يحتوي على جزيئات أدينوسين ثلاثي الفوسفات ، أو ATP. يتفاعل الميوسين ثنائي الرأس 5A ، الذي يحتوي على رأس زائدة ورأس رئيسي ، مع خيوط الأكتين المجلدة. يرتبط الرأس اللاحق للميوسين ب ATP وينفصل عن الأكتين.

يولد التحلل المائي ل ATP ضربة طاقة ، مما يمكن الرأس الخلفي من الارتباط بموضع أمام الرأس الأمامي على طول الفتيل. من خلال ضربات القوة المتتالية ، يتحرك الميوسين على طول خيوط الأكتين المجمدة دون انفصال.

باستخدام الفحص المجهري