موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:24 دقيقة • July 8th, 2025
أدينوسين ثلاثي الفوسفات ، ATP ، مصدر طاقة الخلية الأساسي ، أمرا حيويا للوظائف الخلوية المتنوعة. تحت الضغط ، تتأثر مستويات ATP داخل الخلايا سلبا ، مما يجعل ATP علامة جيدة للخلايا النشطة الأيضية والقابلة للحياة.
للبدء ، يتم تعليق الخلايا السرطانية في صفيحة دقيقة ذات جدران سوداء وقاع شفاف للحد الأدنى من تشتت الضوء أثناء قياس شدة الضوء. تتكون الصفيحة الدقيقة من طلاء هيدروجيل يمنع الخلايا من الالتصاق باللوحة ، مما يتيح التفاعل من خلية إلى خلية والتجميع الذاتي في عضيات الورم - مزارع الأنسجة ثلاثية الأبعاد التي تحاكي البيئة المكروية للورم.
بعد ذلك ، تعامل مع مركب الاختبار. يتفاعل مركب الاختبار مع الخلايا العضوية ، واعتمادا على قدرته المثبطة للنمو ، قد يعطل عمليات التمثيل الغذائي المنتجة للطاقة ، مما يؤدي إلى استنفاد ATP داخل الخلايا.
بعد المعالجة ، أضف كاشفا من خطوة واحدة يتكون من المنظفات ومثبطات ATPase وإنزيم لوسيفيراز والركيزة الخاصة باللوسيفيراز واللوسيفيرين وأيونات المغنيسيوم. احتضان للمدة المطلوبة.
يعمل المنظف على إذابة الأغشية الخلوية ، مما يتسبب في تحلل الخلايا واستخراج ATP في المحلول ، بينما تقوم مثبطات ATPase بتعطيل أي ATPases داخلية تم إطلاقها ، مما يؤدي إلى استقرار ATP.
بعد استخراجه ، يسهل ATP ، في وجود أيونات المغنيسيوم ، ارتباط اللوسيفيرين باللوسيفيراز ، الذي يؤكسد اللوس
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية