مقايسة تصوير مسبار الفلورسنت: تقنية لتصور الإجهاد التأكسدي في الخلايا العضوية المعوية المستزرعة المعالجة بمحفز الأكسجين التفاعلي

تلخص العضيات المعوية منظمة الزغابات الشبيهة بالأمعاء التي تحتوي على تجويف مركزي يتكون من الخلايا الميتة والحطام. التجويف مبطن بخلايا تشبه الزغابات ونتوءات ناشئة تشبه القبو تؤوي الخلايا الجذعية.

تنتج الخلايا العضوية المختلفة مستويات متفاوتة من أنواع الأكسجين التفاعلية ، ROS - منتجات ثانوية لأنشطة التمثيل الغذائي ، والتي يؤدي تراكمها إلى الإجهاد التأكسدي.

لتصور الإجهاد التأكسدي في الخلايا المتنوعة ، ابدأ بأخذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على عضيات ثلاثية الأبعاد مزروعة في مصفوفة الطابق السفلي. تعبر الخلايا الجذعية العضوية عن بروتين مضان أخضر أو بروتين مميز ب GFP يساعد على تمييزها أثناء التصوير.

استكمل الآبار بثلاثي البوتيل هيدروبيروكسيد - محفز ROS - واحتضنها. ينشط المحفز أوكسيديز NADPH المرتبط بالغشاء ويحفز إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا. تنتج الخلايا الجذعية ، كونها نشطة في التمثيل الغذائي ، أنواع الأكسجين التفاعلية أكثر من الخلايا المتمايزة.

أضف مجسات الفلورية الحساسة ل ROS. تدخل هذه المجسات المحبة للدهون الخلايا بسرعة وتتفاعل مع أنواع الأكسجين التفاعلية لإنتاج مضان أحمر. عالج العضيات بصبغة Hoechst التي تلطخ نوى الخلايا الحية بشكل انتقائي. صور العضيات باستخدام مجهر متحد البؤر.

تظهر الخلايا العضوية في المحيط ذات النوى الملطخة درجات متفاوتة من التألق الأحمر ، وهو مرتفع في ا