مقايسة تصوير مسبار الفلورسنت: تقنية لتصور الإجهاد التأكسدي في الخلايا العضوية المعوية المستزرعة المعالجة بمحفز الأكسجين التفاعلي

0 مشاهدات3:28 د • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تلخص العضيات المعوية منظمة الزغابات الشبيهة بالأمعاء التي تحتوي على تجويف مركزي يتكون من الخلايا الميتة والحطام. التجويف مبطن بخلايا تشبه الزغابات ونتوءات ناشئة تشبه القبو تؤوي الخلايا الجذعية.

تنتج الخلايا العضوية المختلفة مستويات متفاوتة من أنواع الأكسجين التفاعلية ، ROS - منتجات ثانوية لأنشطة التمثيل الغذائي ، والتي يؤدي تراكمها إلى الإجهاد التأكسدي.

لتصور الإجهاد التأكسدي في الخلايا المتنوعة ، ابدأ بأخذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على عضيات ثلاثية الأبعاد مزروعة في مصفوفة الطابق السفلي. تعبر الخلايا الجذعية العضوية عن بروتين مضان أخضر أو بروتين مميز ب GFP يساعد على تمييزها أثناء التصوير.

استكمل الآبار بثلاثي البوتيل هيدروبيروكسيد - محفز ROS - واحتضنها. ينشط المحفز أوكسيديز NADPH المرتبط بالغشاء ويحفز إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا. تنتج الخلايا الجذعية ، كونها نشطة في التمثيل الغذائي ، أنواع الأكسجين التفاعلية أكثر من الخلايا المتمايزة.

أضف مجسات الفلورية الحساسة ل ROS. تدخل هذه المجسات المحبة للدهون الخلايا بسرعة وتتفاعل مع أنواع الأكسجين التفاعلية لإنتاج مضان أحمر. عالج العضيات بصبغة Hoechst التي تلطخ نوى الخلايا الحية بشكل انتقائي. صور العضيات باستخدام مجهر متحد البؤر.

تظهر الخلايا العضوية في المحيط ذات النوى الملطخة درجات متفاوتة من التألق الأحمر ، وهو مرتفع في الخلايا الجذعية التي تعبر عن GFP ومنخفض في الخلايا المتمايزة. تظهر الخلايا الميتة ذات مستويات ROS المرتفعة بطبيعتها مضان أحمر في التجويف.

ترتبط شدة التألق الأحمر بمستويات متغيرة من الإجهاد التأكسدي في أنواع الخلايا المختلفة.

لتصور الإجهاد التأكسدي عن طريق الفحص المجهري متحد البؤر ، أضف 1 ميكرولتر من محلول مخزون N-acetylcysteine في الآبار المقابلة للغرفة المكونة من ثمانية آبار مطلية بالعضيات.

بعد حضانة لمدة ساعة واحدة ، أضف 1 ميكرولتر من محلول مخزون هيدروبيروكسيد Tert-butyl في الآبار المقابلة ، واحتضنه لمدة 30 دقيقة أخرى. بعد ذلك ، أضف 1 ميكرولتر من التخفيف 1.25 ملليمولار للمسبار الفلوري لكل بئر ، متبوعا ب 1 ميكرولتر من 1.25 ملليغرام لكل مليلتر محلول Hoechst.

بعد حضانة أخرى مدتها 30 دقيقة ، قم بإزالة الوسيط دون إزعاج BMM ، وأضف برفق 250 ميكرولتر من DMEM الدافئ بدون أحمر الفينول.

قم بتصوير العضيات باستخدام مجهر متحد البؤر ، مزود بغرفة حرارية وإمدادات غاز تكتشف المسبار الفلوري.

باستخدام التحكم الإيجابي ، قم بإعداد شدة الليزر والتعرض الزمني لإشارة ROS ، وتحقق من أن هذه الإشارة أقل في التحكم السلبي. بعد ذلك ، باستخدام العدسة ، قم بفحص الشريحة لتحديد العضيات التي تعبر عن GFP ، وضبط شدة الليزر.

قم بإعداد مكدس z من 25 ميكرومتر ، وحدد المواضع للحصول على صورة مخيطة للعضوية بأكملها للحصول على قسم من العضيات يظهر طبقة واحدة من الخلايا.

08:23

المذنب الفحص كتدبير غير مباشر من الجهازية الاكسدة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:59

تقييم الضرر التأكسدي في الخلايا السطحية الرئيسية للفأرة /الخلايا الجذعية استجابة للأضرار فوق البنفسجية-C (UV-C)

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:53

الكشف عن مجموع أنواع الأكسجين التفاعلي في الخلايا المنضمة من قبل 2'،7'-ديكلوروديدروفلوريسين Diacetate تلطيخ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:29

مقايسة قياس التدفق الخلوي لتحديد الإجهاد التأكسدي: اختبار لتحديد أنواع الأكسجين التفاعلية في العضيات المعوية باستخدام مجسات الفلورية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:16

طريقة لتقييم الآثار المترتبة على مجموعة من موجات وشدة الأحمر / الأشعة تحت الحمراء القريبة العلاج بالضوء على الإجهاد التأكسدي في المختبر

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:37

الخلوية الأكسدة التنميط باستخدام عالية المحتوى المجهري

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:33

التصوير النهج لإجراء تقييمات للسمية الأكسدة باستخدام أجهزة استشعار فلوروجينيك ترميز وراثيا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:12

مقايسة علي أساس الفلورية لتوصيف وتحديد كميات الدهون التجميعية في تشكيل الأمعاء البشرية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:10

تقييم الأكسدة الخلوية باستخدام مقصورة فرعية خاصة ببروتين الفلورسنت الأخضر الحساس للأكسدة الحمراء

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:31

تحليل الإجهاد التأكسدي في المواد العضوية المعوية الفئرانية باستخدام مسبار الفلوروجينيك الحساس لأنواع الأكسجين التفاعلية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026