مقايسة قياس التدفق الخلوي لتحديد الإجهاد التأكسدي: اختبار لتحديد أنواع الأكسجين التفاعلية في العضيات المعوية باستخدام مجسات الفلورية

تنتج الخلايا المعوية أنواعا من الأكسجين التفاعلي - ROS. تحافظ مستويات ROS المعتدلة على التوازن الخلوي ، بينما يمكن أن تتسبب مستويات ROS المرتفعة في موت الخلايا.

لتحديد مستويات ROS في المختبر ، ابدأ بثقافة العضيات ثلاثية الأبعاد المعوية للفأر. تظهر هذه العضيات بنية ظهارة الأمعاء لها نتوءات تشبه القبو تؤوي خلايا جذعية خضراء تعبر عن التألق. كما أنها تحتوي على خلايا متمايزة تشبه الزغابات في المحيط ، وتحيط بالتجويف المركزي الذي يتكون من الخلايا الميتة والحطام. كل هذه الخلايا تنتج مستويات مختلفة من أنواع الأكسجين التفاعلية.

الآن ، عالج العضيات في الآبار المخصصة باستخدام معدلات ROS. بناء على طبيعتها ، يمكن أن تعمل المغيرات كمحفزات أو مثبطات ROS. بعد الحضانة للمدة المطلوبة ، قم بإزالة الوسط المستهلك.

أضف إنزيما محللا للبروتين إلى المزرعة ، مما يؤدي إلى تعطيل بنية العضيات ثلاثية الأبعاد وإطلاق خلايا مختلفة في حالة تعليق. بعد ذلك ، أضف مسبارا فلوروجينيا حساسا ل ROS واحتضنها.

عند دخول الخلايا ، تتفاعل المجسات مع ROS وتتأكسد لإنتاج مضان أحمر. عالج الخلايا باستخدام DAPI - صبغة فلورية مرتبطة بالحمض النووي - والتي تلطخ نوى الخلايا الميتة بشكل انتقائي - مما يخلق تباينا مع الخلايا الحية.

باستخدام مقياس التدفق الخلوي ، قم بتحليل الخلايا الحية السالبة DAPI للحصول على إشارة مضان حمراء تتوافق مع مستوى