مقايسة لوسيفيراز: اختبار عالي الإنتاجية لقياس الإشارات المضيئة باستخدام المراسلين الحيويين المعتمدين على نظام النانو لوسيفيراز المصمم هندسيا

لوسيفيراز هو إنزيم يؤكسد ركيزته لتشكيل منتج مضيء بيولوجيا.

هذه الخاصية من لوسيفيراز مفيدة في تصميم نظام مراسل قائم على النانو لوسيفيراز حيث يتم استخدام النسخة المنقسمة من الإنزيم. في هذا النظام ، تمتلك الأجزاء الأصغر والأكبر تقاربا كبيرا تجاه بعضها البعض ويمكنها إعادة تكوين الإنزيم الوظيفي.

لاستخدام النظام القائم على النانو لوسيفيراز للكشف عن البروتين المستهدف - مجال ربط المستقبلات للبروتين السكري المرتفع SARS-CoV-2 - ابدأ بطبق مزرعة يحتوي على خلايا ملتصقة. تحتوي هذه الخلايا على بلازميد يشفر البروتين المستهدف جنبا إلى جنب مع تسلسل خاص للجزء الأصغر من نانولوسيفيراز هندسيا.

عند التعبير ، تنتج الخلايا المستنبتة مراسلين حيويين - بروتينات مستهدفة مؤتلفة مدمجة مع جزء لوسيفيراز الأصغر. عالج الخلايا بمحلول تحلل ، واحتضان تحت التحريض. تعمل المكونات العازلة على تحلل الخلايا بسرعة - وتطلق المحتوى الخلوي ، بما في ذلك المراسلين الحيويين ، في المادة الطافية.

انقل المادة الطافية إلى لوحة فحص متعددة الآبار. استكمل كل بئر بالمحلول الذي يحتوي على شظايا كبيرة من النانو لوسيفيراز المنقسم ، واحتضانه.

أثناء الحضانة ، يرتبط الجزء الكبير تلقائيا بالوحدة الفرعية الصغيرة للمراسل الحيوي ويحصل على شكل وظيفي. أضف محلولا يحتوي على فوريمازين - الركيزة ، وضع لوحة الفحص في مقياس الإضاءة.

يؤكسد الإنزيم الوظيفي فوري