فحص المراسل الحيوي: تقنية حساسة تستخدم نظام مراسل الإضاءةالأحيات الحيوية للكشف عن الأجسام المضادة ل SARS-CoV-2

JoVE Encyclopedia of Experiments

التقنيات البيولوجية

0 مشاهدات • 3:11 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أثناء عدوى فيروس كورونا 2 ، أو SARS-CoV-2 ، يرتبط مجال ربط مستقبلات بروتين سبايك للفيروس ، RBD ، بالإنزيم المحول للأنجيوتنسين للخلية المضيفة 2 ، ACE2 ، مما يسهل دخول الخلايا الفيروسية. ردا على ذلك ، ينتج الجهاز المناعي أجساما مضادة ترتبط ب RBD الفيروسي وتمنع دخول الخلايا ، مما يقلل من العدوى الفيروسية.

للكشف عن الأجسام المضادة ل SARS-CoV-2 التي تستهدف RBD ، خذ معلق المراسل الحيوي المؤتلف الذي يتكون من شظايا بروتينية صغيرة الحجم ، مدمجة في SARS-CoV-2 spike RBD. أضف الأجسام المضادة القياسية ل SARS-CoV-2 التي تستهدف RBD والخرز المغناطيسي المرتبط بالأجسام المضادة.

أثناء الحضانة ، ترتبط منطقة الجسم المضاد Fc بمجالات ربط Fc للخرز. بالإضافة إلى ذلك ، يرتبط المراسل الحيوي المؤتلف بالأجسام المضادة ل SARS-CoV-2 المرتبطة بالخرز.

بعد الحضانة ، الطرد المركزي الخليط. قم بإزالة المادة الطافية غير المنضومة التي تحتوي على المراسل الحيوي. قم بإعادة تعليق الخرزات المقيدة في المخزن المؤقت. انقله إلى طبق متعدد الآبار.

أضف محلولا يحتوي على شظايا بروتينية كبيرة الحجم ، مع تقارب كبير مع شظايا البروتين صغيرة الحجم. ترتبط شظايا البروتين الكبيرة والصغيرة الحجم ببعضها البعض ، وتشكل إنزيم لوسيفيراز نشط هندسيا.

أضف فوريمازين ، ركيزة لوسيفيراز. يحفز لوسيفيراز أكسدة الفوريماازين ، مما يتسبب في انبعاث الضوء. باستخدام مقياس الإضاءة ، قم بقياس اللمعان ، مما يدل على وجود أجسام مضادة معادلة.

تشير شدة الإشارة العالية إلى تركيزات عالية من الأجسام المضادة ل SARS-CoV-2 التي تستهدف RBD.

من أجل إجراء مقايسة الكشف عن الأجسام المضادة HiBiT-RBD ، قم بإعداد المراسل الحيوي HiBiT-RBD ، واجمع بين 50 ميكرولترا من المادة الطافية المحتوية على HiBiT-RBD مع 1 ميكروغرام من الجسم المضاد التجاري SARS-CoV-2-RBD في أنبوب دقيق سعة 1.5 ملليلتر.

أضف 20 ميكرولترا من البروتين المرتبط بالغلوبولين المناعي ، أو البروتين G ، إلى المحلول. ارفع الحجم الإجمالي إلى 300 ميكرولتر عن طريق إضافة PBS. احتضان الأنابيب على شاكر أنبوب أو دوار لمدة 30 دقيقة ، وجهاز الطرد المركزي عند 12,000 × جم لمدة 30 ثانية ، ثم تخلص من المادة الطافية واغسلها باستخدام PBS. كرر العملية ثلاث مرات لإزالة HiBiT-RBD المجاني.

أعد تعليق الخلايا في 50 ميكرولترا من PBS ، وانقلها إلى لوحة 96 بئر. أضف 50 ميكرولترا من 1x LgBiT ، وانتظر لمدة 5 دقائق. ثم أضف 50 ميكرولترا من ركيزة 1x NanoLuc. اقرأ على الفور إشارة التلألؤ باستخدام مقياس الإضاءة.

04:47

خلايا الثدييات إضاءة الحيوية مستقل للمراقبة المستمرة وريال مدريد في الوقت السمسة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:21

فيروس أنفلونزا مراسل لوسيفيراز الفلورسنت للتصوير الحي والقياس الكمي للعدوى الفيروسية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:25

الكشف عن الأجسام المضادة المحايدة للسارس-CoV-2 باستخدام التصوير الفلوري عالي الإنتاجية للعدوى بالفيروس الزائف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:09

بروتوكول لقاحات مرض السارس المؤتلف RBD المستندة : إعداد البروتين ، والكشف عن تطعيم الحيوانات تحييد

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

02:36

مقايسة لوسيفيراز: اختبار عالي الإنتاجية لقياس الإشارات المضيئة باستخدام المراسلين الحيويين المعتمدين على نظام النانو لوسيفيراز المصمم هندسيا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:35

اختبار مراسل قائم على ELISA لدراسة تفاعل المستقبل والترابط في خلايا BW

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:08

سريع، متعدد المراسل المزدوج IgG وIgM سارس-CoV-2 تحييد المقايسة لنظام تحليل التدفق متعددة الخرز القائم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:44

الكشف عن الأجسام المضادة للمجال الملزمة للمستقبلات من سارس-CoV-2 باستخدام جهاز تقرير حيوي قائم على HiBiT

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:41

التصوير الحي والقياس الكمي للعدوى الفيروسية في الفئران المعدلة وراثيا K18 hACE2 باستخدام SARS-CoV-2 المؤتلف الذي يعبر عنه المراسل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:48

المراقبة الديناميكية للتحويل المصلي باستخدام فحص الخرز المناعي متعدد التحليلات ل Covid-19

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026