اختبار الأجسام المضادة المعادلة للخلايا AAV: تقنية قياس الألوان للكشف عن الأجسام المضادة المعادلة ضد فيروسات معينة مرتبطة بالغدة في المصل

الفيروسات المؤتلفة المرتبطة بالغدة ، rAAVs ، فيروسات الحمض النووي المعدلة وراثيا ، غير المغلفة ، أحادية الشريطة ، هي ناقلات جينية علاجية واعدة.

ترتبط rAAVs بمستقبلات غشاء الخلية المستهدفة وتخضع للالتقام الخلوي بوساطة الكلاثرين ، مما يسهل التوصيل النووي لجينوم rAAV والتعبير الجيني العلاجي. ومع ذلك ، فإن الأجسام المضادة المعادلة للجهاز المناعي الموجهة ضد rAAVs ترتبط بحتمة rAAV المحددة ، مما يتداخل مع ارتباط غشاء الخلية ، والدخول الخلوي ، ونقل الجينات.

للكشف عن الأجسام المضادة المعادلة ضد rAAVs معينة في مصل الأغنام ، أولا ، احصل على تركيزات مناسبة من المصل المخفف. أضف AAVs المؤتلف الذي يعبر عن الفوسفاتيز القلوي المشيمي البشري ، hPLAP ، الجين. السماح للأجسام المضادة المعادلة بربط وتحييد AAVs.

انقل هذا الخليط إلى آبار صفيحة متعددة الآبار تحتوي على ثقافة الخلايا الظهارية البشرية الملتصقة. عند الحضانة ، تخضع AAVs للالتقام الخلوي الخلوي. تعبر الخلايا المنقولة عن hPLAP المرتبط بغشاء الخلية. ومع ذلك ، لا يمكن أن تدخل AAVs المعادلة إلى الخلايا.

تخلص من الوسط من الآبار. استخدم بارافورمالدهيد لإصلاح الخلايا. أضف عازلة دافئة مسبقا ، وقم بتسخين الخلايا لتعطيل الفوسفاتيز القلوي الخلوي الذاتي ؛ hPLAP مقاوم للتعطيل الحراري.

أضف ركائز hPLAP - فوسفات بروموكلورويندوليل ، BCI ، والنيترو الأزرق tetrazoli