موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 5:32 دقيقة • July 8th, 2025
تخضع الخلايا المضيفة المصابة بمسببات الأمراض الميكروبية لموت الخلايا المبرمج - موت الخلايا المبرمج. أثناء موت الخلايا المبرمج ، تؤدي الحمض النووي إلى تحلل الحمض النووي للكروموسومات إلى أجزاء صغيرة ، مما يؤدي إلى موت الخلايا.
للكشف عن موت الخلايا المبرمج باستخدام مقايسة TUNEL ، خذ شريحة زجاجية بها قسم من أنسجة الجلد منزوع البارافينات والمعاد ترطيبه مصاب بممرض فطري.
عالج الأنسجة بالبروتيناز K لتعطيل DNases الخلوية ، ومنعها من تدهور الحمض النووي أثناء التحليل. أضف بيروكسيد الهيدروجين لإخماد التفاعل ، واغسل الشريحة لإزالة البروتيناز K غير المتفاعل.
أضف المخزن المؤقت الذي يحتوي على ثلاثي فوسفات ديوكسيجينين يوريدين المسمى بالديجوكسيجينين ، أو dUTPs. استكمله بترانسفيراز ديوكسي نيوكليوتيديل الطرفي ، وإنزيم TdT ، واحتضانه. في الخلايا موت الخلايا المبرمج ، يحفز إنزيم TdT ارتباط dUTPs المسمى بمجموعات 3′-hydroxyl المكشوفة للحمض النووي المجزأ.
بعد ذلك ، أضف جسما مضادا مضادا للديجوكسيجينين مقترنا إلى مراسل الرودامين ، واحتضنه في الظلام لتسهيل ارتباط الجسم المضاد ب dUTPs المسمى digoxigenin ، مما يضفي مضان أحمر عند التصوير.
عالج عينات الأنسجة باستخدام صبغة نواوية فلورية لتصور النوى. ضع غطاء فوق قسم الأنسجة ، وتصوره تحت المجهر الفلوري.
يساعد التألق الأزرق في تحديد نوى جميع الخلايا في قسم الأنسجة ،
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية