alamarBlue Assay: طريقة فلورومترية حساسة لفحص التأثيرات السامة للخلايا لتركيبات الدموع الاصطناعية على النشاط الأيضي للخلايا الظهارية للقرنية البشرية

JoVE Encyclopedia of Experiments

التقنيات البيولوجية

0 مشاهدات • 3:01 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
يساعد

الغشاء المسيل للدموع - السائل الواقي الذي يغطي العين - على تليين الخلايا الظهارية للقرنية العينية ، CECs ، في حالة صحية ونشطة من الناحية الأيضية. يمكن أن يتسبب الفيلم المسيل للدموع المخترق ، كما هو الحال في مرض جفاف العين ، في تبخر الدموع من CECs ، مما يزيد من قابليتها للإصابة بالعدوى والأضرار الالتهابية.

تعمل تركيبات الدموع الاصطناعية على استقرار الفيلم المسيل للدموع وتحسين احتباس الماء ، مما يمنع جفاف الخلايا.

لفحص التأثيرات السامة للخلايا لاختبار تركيبة الدموع الاصطناعية على CECs باستخدام مقايسة alamarBlue ، ابدأ بثقافة ملتصقة من CECs المشتقة من الإنسان في الوسائط المناسبة. تجاهل الوسائط.

احتضان ثقافة الخلية بتركيز معين من تركيبة المسيل للدموع الاصطناعية. تشكل تركيبة المسيل للدموع طبقة على الخلايا. اعتمادا على التأثير التراكمي للمكونات المكونة ، قد تواجه الخلايا خسارة في نشاط التمثيل الغذائي.

بعد ذلك ، أضف محلول alamarBlue الذي يحتوي على ريزازورين ، وهو صبغة زرقاء اللون ، فلورية ضعيفة ، غير سامة ، قابلة للذوبان في الماء.

ينتشر ريزازورين في الخلايا وينخفض بشكل لا رجعة فيه في الخلايا النشطة الأيضية بشكل أساسي عن طريق اختزال الميتوكوندريا لأنه يقبل الإلكترونات من المتبرعين بالإلكترون لعمليات التنفس الأيضي ، مكونا ريسوروفين وردي اللون وعالي الفلورسنت ، والذي ينتقل بحرية من الخلايا إلى المحلول. انقل المحلول المحتوي على الريسوروفين إلى طبق جديد متعدد الآبار.

باستخدام قارئ لوحة التألق ، قم بقياس شدة التألق. تشير قيمة شدة التألق المنخفضة إلى انخفاض نشاط التمثيل الغذائي الخلوي ، مما يشير إلى تأثيرات غير مرغوب فيها لتركيبة المسيل للدموع على CECs.

قم بإزالة وسائط الثقافة من الآبار ، وقم بمعالجة الخلايا على الفور باستخدام 150 ميكرولتر من تركيبة الاختبار أو محلول التحكم في الوسائط. ثم احتضن الخلايا لمدة 30 دقيقة.

قم بإزالة محلول الاختبار من الخلايا ، وأضف 0.5 مل من محلول صبغة التمثيل الغذائي بنسبة 10٪. احتضان الخلايا لمدة أربع ساعات أخرى.

بعد الحضانة ، قم بإزالة 100 ميكرولتر من محلول الصبغة من كل بئر وانقله إلى طبق 96 بئر. استخدم قارئ الألواح لقياس تألق كل بئر ، واضبط الإثارة على 540 نانومتر والانبعاث على 590 نانومتر.

10:00

استهداف بيوفيلم أسوشيتد المكورات العنقودية الذهبية استخدام ريسازورين استنادا الفحص المخدرات-القابلية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:29

وإنتاجية عالية الفحص المدعم لتقييم فعالية الدواء ضد بلعم Passaged المتفطرة السلية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:22

استراتيجية لتحديد المركبات التي تؤثر على نمو الخلايا والبقاء على قيد الحياة في خلايا الثدييات المستزرعة في الإنتاجية المنخفضة إلى المتوسطة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:46

فحص متعدد الإرسال قائم على الخرزة لتحليل السيتوكينات في عينات الدموع البشرية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:22

حبة على أساس مقايسة متعدد لتحليل الملامح سيتوكين المسيل للدموع

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:04

نموذج أرنب من مرض العين الجاف المُقوّل المُسبّب بواسطة Concanavalin حقنة في الغدد اللارِسية: تطبيق على دراسات فعالية الدواء

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:29

تأثير تركيبات المسيل للدموع الاصطناعية على النشاط الأيضي للخلايا الظهارية القرنية البشرية بعد التعرض للديسيكيشن

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:31

تحديد سمية الأشعة فوق البنفسجية والمواد الكيميائية على الخلايا الظهارية القرنية البشرية الأولية والخالدة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:10

نماذج الحيوانات خارج الجسم الحي وفي الجسم الحي للإصابات الميكانيكية والكيميائية لظهارة القرنية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:22

مقايسات السمية الخلوية مع خطوط خلايا الزرد

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026