موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:21 دقيقة • July 8th, 2025
حشرة الأمعاء الوسطى على منطقة خلية نحاسية - CCR - وهي المسؤولة عن تحمض الأمعاء. تحتوي هذه المنطقة على خلايا إفرازية متخصصة - خلايا نحاسية - تنتج الحمض الذي يمر عبر القناة الضيقة التي تشكلها الخلايا الخلالية المجاورة. يطلق الحمض في تجويف الأمعاء للمساعدة في الهضم.
لمراقبة تحمض الأمعاء في ذبابة الفاكهة ، خذ الذباب البالغ المتعطش لفترة كافية. ضع الذباب في صفيحة بتري تحتوي على قطرة واحدة من طعام الذباب المكملة بالبروموفينول الأزرق ، أو BPB - صبغة مؤشر استشعار الأس الهيدروجيني. اسمح للذباب الجائع بالبحث عن الطعام لفترة محددة.
بعد تناول الطعام ، يصل الحمض الذي تنتجه الخلايا النحاسية إلى تجويف الأمعاء ويختلط مع الطعام الذي يحتوي على BPB. عند درجة الحموضة الحمضية ، يتم بروتونات جزيئات BPB ، مما يغير لونها من الأزرق إلى الأصفر - مما يشير إلى التحمض.
عند الانتهاء من المدة التجريبية ، ضع صفيحة بتري على الجليد. تؤدي درجة الحرارة المنخفضة إلى إيقاف النشاط العصبي العضلي في الذباب وتخديره. ضع ذبابة فردية تحت مجهر مجسم وعزل الجهاز الهضمي السليم جراحيا.
افحص لون CCR لتحديد حالة تحمض الأمعاء. يشير اللون الأصفر إلى التحمض ، بينما يشير اللون الأزرق إلى عدم وجود تحمض.
افحص الجهاز الهضمي لجميع الذباب ، واحسب النسبة المئوية للأفراد الذين يظهرون تحمض الأمعاء.
ابدأ في الترتيب لفحص مراقبة تحمض الأمعاء مع تحضير طعام الذباب باستخدام صبغة بروموفينول الزرقاء أو BPB المستشعرة للأس الهيدروجيني. للقيام بذلك ، قم بإذابة طعام الذباب في الميكروويف ، واتركه يبرد حتى يصبح فاترا. أضف 1 مليلتر من 4٪ BPB إلى 1 مليلتر من الطعام الفاتر مع خلط جيدا. باستخدام ماصة ، أضف طعام الذباب الذي يحتوي على BPB في نقطة واحدة من حوالي 200 ميكرولتر في وسط طبق بتري.
بعد ذلك ، اجمع ذباب ذبابة الفاكهة السوداء غير البكر البالغ من العمر 0 إلى 2 يوما ، واسمح للذباب بالتعافي من طعام دقيق الذرة القياسي. قبل التجربة ، قم بتجويع الذباب لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة في قارورة تحتوي على منديل مناديل مختبر مبلل بحوالي 2 مل من الماء منزوع الأيونات.
انقل الذباب الجائع إلى طبق بتري يحتوي على نقاط مفردة من طعام الذباب الطازج المكمل بنسبة 2٪ BPB للسماح للذباب بالبحث عن الطعام لمدة أربع ساعات في درجة حرارة الغرفة ، أثناء تعرضه للضوء.
بعد أربع ساعات ، اجمع الذباب. بعد ذلك ، انتقل إلى عزل أحشاء الذباب المخدر جراحيا في 1x PBS باستخدام ملقط تحت المجهر المجسم. احسب عدد الذباب الذي يظهر تلطيخا قويا ل BPB في الأحشاء ، واحسب النسبة المئوية باستخدام المعادلة.