فحص البروتين القابل للذوبان لتحديد محتوى البروتين القابل للذوبان في الأنسجة النباتية

لتحديد محتوى البروتين القابل للذوبان في الأنسجة النباتية ، في أنبوب ، ابدأ بكمية مناسبة من الأنسجة النباتية المطحونة المجففة.

أضف هيدروكسيد الصوديوم ، وهو قلوي ، إلى الأنبوب وصوتي. تعمل البيئة القلوية ذات القوى الميكانيكية على تعطيل الخلايا ، وتطلق محتويات داخل الخلايا ، بما في ذلك الجزيئات الكبيرة - البروتينات القابلة للذوبان والكربوهيدرات. احتضان في درجات حرارة أعلى.

في وجود الحرارة ، تسبب القلويات التحلل المائي للبروتين ، وتشكل ببتيدات أصغر وتزيد من قابلية ذوبان البروتين. بالإضافة إلى ذلك ، تتحلل الكربوهيدرات.

الطرد المركزي الخليط. اجمع المادة الطافية المحتوية على البروتين المذاب. أضف حمض الهيدروكلوريك لتحييد درجة الحموضة.

عالج العينة بحمض ثلاثي كلورو أسيتيك ، TCA. يعطل TCA قشرة الترطيب المحيطة بالبروتينات ، مما يؤدي إلى تراكم البروتين وهطول الأمطار.

جهاز طرد مركزي وإزالة المادة الطافية المحتوية على TCA. اغسل حبيبات البروتين بالأسيتون المثلج لإزالة أي بقايا TCA, والتي قد تتداخل مع تقدير البروتين القابل للذوبان.

جفف الأسيتون بالهواء. أعد تعليق حبيبات البروتين في هيدروكسيد الصوديوم. خفف بالماء منزوع الأيونات. نقل إلى آبار لوحة متعددة الآبار.

أضف محلولا حمضيا من صبغة Coomassie Brilliant Blue G-250. في ظل الظروف الحمضية ، ترتبط الصبغة ببقايا الأحماض الأمينية الأساسية في البروتينات ا