مقايسة β-Galactosidase لتقييم السمية الخلوية التي يسببها الدواء في الطفيليات
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:40 دقيقة • April 30th, 2023
المثقبية الكروزية ، طفيلي ملزم داخل الخلايا ، يغزو الخلايا المضيفة للثدييات على شكل المثقبيات - مرحلة نمو سوط غير تكاثرية - ويتمايز إلى amastigotes غير سوطية ، والتي تتكاثر في السيتوبلازم عن طريق الانشطار الثنائي.
بعد التكاثر ، تتمايز الآماستيجوت مرة أخرى إلى المثقبيات التي تعطل الخلايا المضيفة لتدخل الدورة الدموية ، مما يؤدي إلى عدوى جهازية.
لتقييم الإمكانات السامة للخلايا في المختبر لاختبار دواء مضاد للطفيليات ضد المثقبيات الكروزية، ابدأ بزراعة طفيليات المثقبيات الكروزية المعدلة وراثيا - في المرحلة النمائية المرغوبة - التي تعبر بثبات عن إنزيم β-جالاكتوزيداز.
الطفيليات في وسائط مناسبة. انقله إلى طبق متعدد الآبار. أضف تركيزات مناسبة من دواء اختبار مضاد للطفيليات. حضن.
ينتشر الدواء بشكل سلبي من خلال أغشية الطفيليات ويتم استقلابه إلى مواد وسيطة سامة. تدخل هذه المستقلبات إلى النوى وتسبب تلف الحمض النووي ، مما يثبط تخليق البروتين ، بما في ذلك β-galactosidase ، مما يؤثر سلبا على بقاء الطفيليات.
استبدل الوسائط المحتوية على الدواء بمخزن مؤقت لمنع تداخل اللون أثناء قياس الامتصاص. أضف الركيزة ل β-galactosidase ، والكلوروفينول الأحمر galactopyranoside ، و CPRG - نظير الجالاكتوسيد غير السام - مكمل بمنظف خفيف غير أيوني. حضن.
يقوم المنظف بتحلل الطفيليات ، وإطلاق β-galactosidase في المحلول. بعد
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية