فحص التكلس لقياس تركيز الكالسيوم في الخلايا الخلالية للصمام الأبهري

تحتوي وريقات الصمام الأبهري على مجموعة غير متجانسة من الخلايا الخلالية للصمام، أو VICs، موزعة في جميع أنحاء طبقات المصفوفة خارج الخلية. عند التحفيز ، تتحول VICs إلى بانيات العظم - خلايا مكونة لمصفوفة العظام.

تفرز بانيات العظم الناضجة الكولاجين وبروتينات مصفوفة العظام. تساعد هذه البروتينات بانيات العظم على الالتصاق بالمصفوفة. أخيرا ، تدخل أيونات الكالسيوم داخل الخلايا إلى بيئة المصفوفة ، وتترسب إلى جانب الفوسفات كعقيدات معدنية ، مما يؤدي إلى تكلس الصمام الأبهري.

لتقييم تركيز الكالسيوم في الصمامات الأبهرية المتكلسة ، ابدأ بزراعة VICs في صفيحة من ستة آبار. تخلص من وسط الاستزراع ، وأضف وسيطا عظميا في البئر ، واحتضن.

أثناء الحضانة ، يحفز الأنسولين الموجود في وسط العظم VICs على التمايز إلى أنماط ظاهرية للعظام. تفرز بانيات العظم هذه بروتينات مصفوفة العظام وحمض الأسكوربيك في وسط العظم مما يدفعها إلى تكوين مصفوفة خارج الخلية غنية بالكولاجين.

أخيرا ، يشكل الكالسيوم داخل الخلايا وفوسفات الوسط بلورات معدنية في الوسط.

قم بإزالة الوسط وأضف محلول حمض الهيدروكلوريك. احتضان لإذابة أيونات الكالسيوم في المحلول. قم بتوزيع الوسط الحمضي الذي يحتوي على الكالسيوم في بئر صفيحة متعددة الآبار.

أضف صبغة حساسة للكالسيوم واحتضنها. ترتبط جزيئات الصبغة بأيونات الكالسيوم في الوسط الحمضي ، وتشكل مركبا صبغيا أرجواني