موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:57 دقيقة • July 8th, 2025
في أسماك الزرد ، تسبب الجسيمات الدقيقة المحيطة ، أو PM - أحد ملوثات الهواء - خلل في القلب الناجم عن الإجهاد التأكسدي.
لدراسة تأثير الجسيمات الجسيمية على أسماك الزرد ، ابدأ بتعريض أجنة أسماك الزرد للمواد العضوية القابلة للاستخراج المشتقة من PM ، EOM ، والتي تؤدي إلى توليد أنواع الأكسجين التفاعلية ، أو ROS.
يؤكسد ROS الجوانين الأساسي للحمض النووي إلى 8-hydroxy-2′-deoxyguanosine أو 8-OHdG ويتسبب في فسفرة هيستون H2AX لتشكيل γH2AX - علامة لفواصل الحمض النووي المزدوج.
بعد التعرض ، قم بتشريح قلب الزرد وضعه على شريحة زجاجية. عالج القلب بمحلول مثبت يربط البروتينات ، مما يؤدي إلى استقرار البنية الخلوية.
بعد ذلك، أضف كاشف حظر لمنع مواقع الربط غير المحددة. أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف γH2AX و 8-OHdG في خلايا القلب.
بعد ذلك ، أضف جسمين مضادين ثانويين مختلفين اللون يحملان علامة الفلورسنت يرتبطان على وجه التحديد بمنطقة Fc للجسم المضاد الأساسي الخاص بهما. أخيرا ، قم بتلطيخ العينة ب DAPI - وهي بقعة خاصة بالحمض النووي - ترتبط بالأخدود الثانوي للتسلسلات الغنية ب AT في الحمض النووي لتشكيل مركب فلورسنت.
ضع الشريحة تحت المجهر الفلوري لمراقبة الإشارات من تعبير 8-OHdG و γH2AX في قلوب أجنة الزرد المعالجة ب EOM.
تشير شدة التألق العالية بشكل ملحوظ من خلايا القلب إلى تلف الحمض النووي التأكسدي الناج
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية