مقايسة الموت العصبي لتقييم موت الخلايا في نموذج الصرع خارج الجسم الحي

يؤدي

الصرع — النوبات التلقائية والمتكررة في الدماغ — إلى موت الخلايا العصبية.

لدراسة الموت العصبي في نموذج الصرع خارج الجسم الحي، ابدأ بأخذ شريحة عضوية من قشرة الأنف والحصين — محضرة من دماغ جرو الفئران — في وسط مناسب.

تتكون الشريحة العضوية من قشرة الأنف والحصين. في ظل الحرمان التدريجي من المصل ، تصور هذه المناطق أحداث الصرع المتطورة ، مما يؤدي إلى موت الخلايا العصبية الناجم عن النوبات.

أضف الكمية المطلوبة من يوديد البروبيديوم ، PI - صبغة فلورية - إلى المزرعة واحتضنها. من خلال غشاء الخلية التالف ، يدخل PI الخلايا العصبية الميتة ويرتبط بالحمض النووي. الخلايا العصبية الحية ، ذات الغشاء السليم ، غير قادرة على امتصاص PI.

ضع شريحة النمط العضوي على شريحة مجهرية للتلوين المناعي. أضف محلول حجب النفاذية واحتضانه.

تعمل

جزيئات المنظفات الموجودة في المحلول على إذابة دهون الغشاء، مما يخلق مساما في غشاء الخلايا السليمة - مما يجعلها قابلة للاختراق لخطوات تلطيخ المناعة اللاحقة. ترتبط البروتينات الموجودة في محلول الحجب بشكل سلبي بمواقع غير محددة للخلايا ، مما يقلل من تلطيخ الخلفية.

أضف محلول الجسم المضاد الأساسي الذي يخترق داخل الخلايا العصبية ويرتبط بالمستضد النووي الخاص بالخلايا العصبية - NeuN - الموزع في المصفوفة النووية. أضف الأجسام المضادة الثانوية ذات العلامات الفلورية التي ترتبط بالأجسام المض