موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 6:19 دقيقة • July 8th, 2025
التعرض للعوامل الضارة إلى حدوث فواصل أحادية ومزدوجة الشريطة في الحمض النووي الخلوي ، مما يؤدي إلى تلف الحمض النووي.
للكشف عن تلف الحمض النووي ، ابدأ بتعليق خلية واحدة من الخلايا المعالجة كيميائيا في agarose المسال ونقطة الانصهار المنخفضة. قم بتحميل المعلق على شريحة زجاجية ، واترك الاغاروز يتجمد - مما يتيح تثبيت الخلايا داخل مصفوفة الهلام المسامية.
عالج الخلايا بمحلول التحلل. تعمل المنظفات الموجودة في المخزن المؤقت على إذابة الأغشية الخلوية والنووية ، بينما تزيل الأملاح الهستونات من الحمض النووي ، وتشكل جسما نوويا يحتوي على الحمض النووي المتصل بالمصفوفة النووية.
احتضان الشرائح في مخزن مؤقت للرحلان الكهربائي القلوي. يؤدي هذا إلى استرخاء الحمض النووي وتوليد شظايا أحادية الشريطة. ضع الشريحة في جهاز الرحلان الكهربائي ، وقم بتوصيلها بمصدر الطاقة. هذا يسمح بهجرة الحمض النووي سالب الشحنة نحو الأنود الموجب.
يظل الحمض النووي غير التالف مقيدا داخل الجسم النووي. في المقابل ، تبدأ شظايا الحمض النووي الأصغر والتالفة في التحرك نحو الأنود. تشكل هذه الحركة التفاضلية بنية تشبه المذنب ، حيث يشكل الحمض النووي غير التالف الرأس ، بينما يشكل الحمض النووي التالف ذيل المذنب.
احتضان الشريحة في مخزن مؤقت للتحييد للسماح لشظايا الحمض النووي أحادية الشريطة بإعادة تشكيلها. بعد ذلك ، عالج الشريحة بصبغة فلوري
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية