فحص امتصاص الأحماض الأمينية ذات العلامات المشعة لتحديد الامتصاص الخلوي للأحماض الأمينية

ناقلات الأحماض الأمينية هي بروتينات مرتبطة بالغشاء تتوسط نقل الأحماض الأمينية عبر أغشية الخلايا ، وتنظم العمليات الخلوية الحيوية.

لدراسة امتصاص الأحماض الأمينية في المختبر ، خذ مزرعة الخلايا اللحمية المشتقة من نخاع عظم الفأر. شفط وسط النمو. أضف عازلة مسخنة مسبقا مكملة بالجلوتامين — حمض أميني — مسمى بالهيدروجين المشع. احتضان للمدة المطلوبة.

يوفر المخزن المؤقت الدافئ مسبقا درجة حرارة فسيولوجية ودرجة حموضة مناسبة مطلوبة لامتصاص الجلوتامين الخلوي. تتكون ناقلات الجلوتامين من مجالات النقل - المسؤولة عن نقل الركيزة عبر النقل المشترك المقترن بأيون الصوديوم - ومجالات السقالات المثبتة على الغشاء.

يرتبط مجال النقل بالجلوتامين المليء بالإشعاع جنبا إلى جنب مع أيونات الصوديوم من المخزن المؤقت. عند الارتباط ، يطلق الجزيئات في السيتوبلازم. في الوقت نفسه ، ينقل مجال النقل أيونات الصوديوم داخل الخلايا والأحماض الأمينية المحايدة خارج الخلية ، مما يؤدي إلى التوازن الخلوي.

اغسل الخلايا بمحلول بارد مثلج ، وقم بإنهاء التفاعل وإزالة أي جلوتامين خارج الخلية. أضف محلول منظف. يعمل المنظف على تحلل الخلايا ، مما يتسبب في إطلاق الجلوتامين المسمى بالإشعاع داخل الخلايا.

الطرد المركزي المحلل. أضف المادة الطافية المحتوية على الجلوتامين إلى قارورة مع كوكتيل متلألئ ، وضع القارورة داخل عداد التلألؤ.

تنبعث جزيئات الجلو