الفحص الطيفي لتحديد نشاط سينسيز الجليكوجين

سينسيز الجليكوجين - إنزيم حاسم في تخليق الجليكوجين - يشق جلوكوز ثنائي فوسفات اليوريدين ، أو UDP-glucose - سكر النيوكليوتيدات - في UDP وبقايا الجليكوسيل ويضيف مونومر الجلوكوز المنبعث إلى سلسلة الجليكوجين المتنامية.

لتقدير نشاط سينسيز الجليكوجين ، ابدأ بتناول خليط تفاعل يحتوي على الجليكوجين ، و UDP-glucose ، و ATP ، و phosphoenolpyruvate ، و nicotinamide adenine dinucleotide ، أو NADH ، في أنبوب. أضف ثنائي فوسفات النوكليوزيد ، أو NDP ، وإنزيم كيناز ، وكوكتيل إنزيم بيروفات كيناز ونازعة هيدروجين اللاكتات. امزج المحتويات واحتضنها.

أضف عينة تحتوي على سينسيز الجليكوجين إلى الأنبوب لبدء التفاعل الأنزيمي.

يعمل سينسيز الجليكوجين على UDP-glucose ، مما يولد UDP وبقايا جليكوزيل. يمتص الإنزيم مونومر الجلوكوز الحر ويدمجه في سلسلة الجليكوجين لخليط التفاعل. في وجود ATP ، يقوم NDP kinase في خليط التفاعل بفسفرة UDP غير المستخدم ، ويحوله إلى UTP ويولد ADP.

يعمل إنزيم البيروفات كيناز على ADP ويضيف فوسفات يتبرع به فوسفوينول بيروفات في خليط التفاعل لإنتاج ATP والبيروفات. بعد ذلك ، يقوم نازعة هيدروجين اللاكتات بتحويل البيروفات إلى لاكتات ويؤكسد NADH أثناء التفاعل.

قم بقياس الانخفاض في امتصاص NADH عند 340 نانومتر لتحديد كمية NADH المستهلكة ، مما يشير إلى نشاط الإنزيم الناجح.

للبدء بتحديد نشاط سينسيز الجليك