التحليل القائم على المعاوقة الخلوية لمراقبة العمليات الخلوية في الوقت الفعلي

0 مشاهدات3:52 د • July 8th, 2025

للقياس المستمر لسلوك الخلية باستخدام تحليل الخلية في الوقت الفعلي ، RTCA ، احصل على صفيحة RTCA microtiter تحتوي على مصفوفات أقطاب كهربائية دقيقة ذهبية لقياس مقاومة مدمجة في قاع البئر. أضف بعناية وسط زراعة الخلايا إلى الآبار.

داخل الوسط الموصل للكهرباء ، قم بتطبيق جهد كهربائي ضعيف عبر الأقطاب الكهربائية الدقيقة. يتسبب الجهد في تدفق التيار الكهربائي بين الأقطاب الكهربائية الدقيقة ، مما يسهل قياس مقاومة خط الأساس - المقاومة الكهربائية المتأصلة في الوسط.

ماصة التركيزات المطلوبة من تعليق خلايا الثدييات إلى الآبار المحتوية على المتوسطة. اسمح للخلايا بالتوزيع بشكل موحد في البئر.

أثناء الحضانة ، تلتصق الخلايا بقاع البئر. تعمل الخلايا الملتصقة على الأقطاب الكهربائية الدقيقة كعازل ، مما يحد من تدفق التيار ويزيد من المقاومة.

تدريجيا ، تتكاثر الخلايا على الأقطاب الكهربائية الدقيقة ، مما يؤدي إلى زيادة المعاوقة الأسية.

بعد تكوين طبقة الخلية المتقاربة ، تواجه الخلايا الحرمان من المغذيات وتخضع للموت. نتيجة لذلك ، تنفصل الخلايا عن الأقطاب الكهربائية الدقيقة ، مما يقلل من المقاومة.

يسهل

قياس المعاوقة المستمر المراقبة في الوقت الفعلي للأحداث الخلوية ، بما في ذلك تكاثر الخلايا وموتها.

لتحديد كمية الخلية المناسبة لعدوى الخلايا ، قم بإعداد مزارع خلايا MDCK ملتقية على مدار 24 ساعة ، حوالي 80٪ ، كما هو موضح ، قبل غسل الخلايا باستخدام PBS ، وحصادها بحضانة لمدة 45 دقيقة في 3 ملليلتر من 0.25٪ trypsin-EDTA لكل قارورة عند 37 درجة مئوية.

عندما تنفصل الخلايا ، أوقف التفاعل ب 7 ملليلتر من وسط المزرعة الطازجة لكل قارورة ، واحسب الخلايا من كل ثقافة. قم بتخفيف الخلايا إلى 4 × 105 خلايا لكل مليلتر من وسط زراعة الخلايا ، وقم بإجراء تخفيفات تسلسلية مزدوجة للخلايا ، كما هو موضح.

ضع لوحة E في درجة حرارة الغرفة لعدة دقائق ، قبل إضافة 100 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا إلى كل بئر دون لمس أقطاب اللوحة الإلكترونية. افتح الحوامل وأدخل الواجهة الأمامية للوحة في جيب المهد لأداة قياس المعاوقة. أغلق باب الحاضنة وافتح البرنامج.

في "الإعداد الافتراضي لنمط التجربة قم بتمييز الحوامل المحددة وانقر نقرا مزدوجا على الصفحة العلوية لإدخال اسم التجربة. انقر فوق "تخطيط" وأدخل معلومات العينة اللازمة لكل بئر محدد من اللوحة. انقر فوق "جدولة" | "الخطوات" |، و "إضافة خطوة". سيضيف البرنامج تلقائيا خطوة مدتها 1 ثانية لقياس مقاومة الخلفية.

انقر فوق "تنفيذ" و "بدء / متابعة". انقر فوق "مؤامرة" و "إضافة" لتحديد الآبار المناسبة ، مع التأكد من أن مقاومة الخلفية بين سالب 0.1 و 0.1 ، قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.

بعد ذلك ، قم بإزالة اللوحة من المهد وأضف 100 ميكرولتر من كل معلق خلية إلى الآبار المناسبة في نسختين. اترك اللوحة الإلكترونية في غطاء التدفق الصفحي لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة للسماح بتوزيع موحد للخلايا على قيعان الآبار ، قبل تحميل اللوحة الإلكترونية في جيب المهد. انقر فوق "جدولة" و "إضافة خطوة" ، وأدخل قيما لمراقبة الخلايا كل 30 دقيقة لمدة 200 تكرار قبل تحديد "بدء / متابعة".

للتحقق من بيانات مقاومة الخلية ورسمها ، انقر فوق "مخطط" وحدد تركيز الخلايا الذي يسبق المرحلة الثابتة مباشرة بعد 24 ساعة من البذر ، للحصول على الخلايا التي لا تزال في مرحلة النمو أثناء العدوى الفيروسية.

06:13

بروتوكول الدوس خطوة بخطوة لزيادة الإنتاجية في مقالات GPCR المستندة إلى المعاوقة الخالية من التسميات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:23

المعاوقة القائمة على قياس في الوقت الحقيقي من هجرة الخلايا السرطانية والغزو

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:00

الكشف في الوقت الحقيقي والتقاط المجموعات الفرعية للخلايا الغازية من الثقافات المشتركة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:51

في الوقت الحقيقي المعاوقة الكهربائية تقنية تستند إلى قياس غزو أحادي الطبقة الخلية البطانية من قبل خلايا السرطان

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:04

مقايسة المعاوقة القائمة على المصفوفة ثلاثية الغرف: تقنية تحليل في الوقت الفعلي لتقييم الإمكانات الغازية للخلايا السرطانية عن طريق قياس المعاوقة الكهربائية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

02:52

مقايسة حركية البقاء على قيد الحياة القائمة على المعاوقة الخلوية لتقييم بقاء الفيروس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:15

القياسات القائمة على المعاوقة لغزو خلايا سرطان الدماغ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:30

الكهربائية الخلوي الركيزة مقاومة استشعار لتقدير حجم انتشار غشائي، الحاجز وظيفة، والحركة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:23

محلل خلية مقرها الممانعة الحقيقي في الوقت كأداة لتحديد المسارات الجزيئية تشارك في العصبية والحمايه العصبيه في خط الخلية العصبية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:11

باستخدام الممانعة الخلوي الركيزة ويعيش التصوير خلية قياس التغييرات في الوقت الحقيقي في التصاق الخلوية ودي التصاق المستحث بواسطة مصفوفة تعديل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 29 أغسطس 2026