مقايسة حركية البقاء على قيد الحياة القائمة على المعاوقة الخلوية لتقييم بقاء الفيروس

ترتبط الفيروسات بمستقبل الخلية المضيفة وتستوعب في جسيم داخلي. يندمج الغشاء الداخلي مع الغشاء الفيروسي ، ويطلق محتويات فيروسية داخل الخلية.

عند الوصول إلى النواة ، ينسخ الجينوم الفيروسي إلى mRNA ويترجم لاحقا لتكوين بروتينات فيروسية. تدخل المكونات الفيروسية إلى السيتوبلازم وتتجمع في فيروسات ، والتي تخرج من الخلية وتسبب تأثيرات اعتلال خلوي - تغيرات في مورفولوجيا الخلية المضيفة ، والموت.

لتقييم حركية بقاء الفيروس عن طريق قياس مقاومة الخلية المضيفة ، خذ صفيحة متعددة الآبار مغطاة بأقطاب كهربائية دقيقة لقياس المعاوقة في قاعها. أضف تعليق الخلية المضيفة إلى الآبار ، واحتضن للسماح للخلايا بالالتصاق بسطح القطب ، والنمو.

بعد ذلك ، خذ المعلقات الفيروسية المعالجة مسبقا من المحلول الملحي بأحمال فيروسية مختلفة. تزود المعالجة الملحية الفيروس بالكلوريد ، الذي ينتج حمض هيبوكلوروس الذي يقتله - مما يقلل من العدوى الفيروسية. أضف هذه المعلقات الفيروسية إلى الآبار الخاصة بها.

قم بقياس المعاوقة الخلوية - ظاهرة معارضة تدفق التيار الكهربائي عبر الأقطاب الكهربائية - بواسطة الخلايا الملتصقة.

تصيب الفيروسات الخلايا المضيفة الملتصقة وتغير مورفولوجيتها ، مما يتسبب في انفصال الخلايا المتحولة عن الأقطاب الكهربائية. بمرور الوقت ، مع إصابة المزيد من الخلايا ، تقل المعاوقة الخلوية بوساطة الخلية المضيفة.

ارسم مؤشر الخلية ، وهو التغيير في المعاوقة بسبب انفصال الخلايا المصابة ، بمرور الوقت.

لتقييم حركية بقاء فيروس الأنفلونزا A ، أضف كلوريد الصوديوم إلى التركيز النهائي البالغ 35 غراما لكل لتر في الماء المقطر ، وأضف 900 ميكرولتر من المحلول الملحي الناتج إلى أنابيب التبريد سعة 2 ملليلتر. أضف 100 ميكرولتر من المخزون الفيروسي إلى كل أنبوب تبريد ، وضع الأنابيب في حاضنة 35 درجة مئوية ، للفترة الزمنية التجريبية المناسبة.

في اليوم السابق لنهاية الحضانة ، قم بزرع 3 × 10⁴ خلايا MDCK منقسمة حديثا في 100 ميكرولتر من وسط انتشار الفيروس لكل بئر ، في صفيحة ميكروتيتر 16 بئرا ، وكرر الخطوات التي تسمح بقياس مقاومة الخلفية والتوزيع المنتظم للخلايا في قاع الآبار. ثم قم بزراعة الخلايا لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

في اليوم التالي ، اغسل الخلايا مرتين ، ثم قم بإصابة الخلايا ب 100 ميكرولتر من الفيروس المقطر بالمحلول الملحي ، مخفف 10 مرات في وسط مزرعة طازجة ، كما هو موضح ، وراقب مقاومة الخلية كل 15 دقيقة لمدة 100 ساعة على الأقل.