موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:35 دقيقة • July 8th, 2025
تولد الخلايا مستويات منخفضة من الجذور الحرة أثناء عمليات التمثيل الغذائي.
في الحالات المرضية ، يحدث الإفراط في إنتاج الجذور الحرة ، مما يسبب الإجهاد التأكسدي. تهاجم هذه الجذور الحرة الأحماض الدهنية المتعددة غير المشبعة في فوسفوليبيدات الغشاء الخلوي في عملية تسمى بيروكسيد الدهون. هذا يشكل منتجات أكسدة سامة ، بما في ذلك هيدروبيروكسيدات الدهون ومالوندي الديهايد (MDA) ، والتي تسبب تلف الغشاء وموت الخلايا.
للكشف عن الإجهاد التأكسدي في مصل الدم البشري في المختبر باستخدام مقايسة المادة التفاعلية لحمض الثيوباربيتوريك (TBARS) ، ابدأ بأنبوب يحتوي على مصل بشري معالج بمركب محفز للأكسدة. يتكون المصل المعالج بشكل رئيسي من منتجات بيروكسيد الدهون - MDA وهيدروبيروكسيدات الدهون - جنبا إلى جنب مع الدهون الفوسفورية والدهون والبروتينات.
بعد ذلك ، أضف كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) واخلطها لإذابة الدهون وإطلاق MDA. يفسد SDS أي بروتينات ملوثة. أضف عازلة حمضية مناسبة ، متبوعا بحمض ثيوباربيتوريك الحمضي (TBA). احتضان في درجة حرارة عالية.
في ظل الظروف الحمضية ودرجات الحرارة المرتفعة ، تتفاعل جزيئات TBA مع MDA ، وتشكل مركب MDA-TBA أحمر وردي مستقر ، يسمى TBARS. احتضان على الجليد لإيقاف التفاعل وتثبيت المجمعات الموجودة.
الطرد المركزي. اجمع وانقل المادة الطافية المحتوية على MDA-TBA إلى صفيحة متعددة الآبار. باستخ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية