موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:52 دقيقة • July 8th, 2025
تعمل الخلايا العصبية النامية على توسيع العمليات السيتوبلازمية من أجسام الخلايا عن طريق نمو الخلايا العصبية لتطوير التشعبات والمحاور ، والتي تعتبر ضرورية للتواصل من الخلايا العصبية إلى الخلايا العصبية.
لدراسة تأثير البروتين المستهدف على نمو العصبات ، خذ صفيحة متعددة الآبار مع غطاء مطلي ببولي D-lysine في قاعدته. يحتوي سطح الغطاء على ثقافة ملتصقة من الخلايا العصبية القشرية الأولية المشتقة من دماغ الفئران الجنينية.
عالج الخلايا العصبية بمزيج يحتوي على نوعين من البلازميدات - بلازميد EGFP يشفر بروتين الفلورسنت الأخضر المعزز وبلازميد ثان يشفر البروتين المستهدف في كاشف تعداء مناسب.
يسهلكاشف التعدي دخول البلازميدات إلى الخلايا.
بعد التعداء ، يتم التعبير عن كلا البلازميدات ، مما ينتج عنه بروتينات فلورية خضراء وبروتينات مستهدفة. يضفي التعبير عن EGFP مضان أخضر على الخلايا المنقولة بشكل مشترك.
تبدأالبروتينات المستهدفة ذات الإمكانات المحفزة لنمو العصبات الإشارات الخلوية ، مما يعزز إعادة تنظيم الهيكل الخلوي ويؤدي إلى تطوير الإسقاطات العصبية وامتداداتها.
استنشق الوسط المستهلك ، وإصلاح الخلايا باستخدام بارافورمالدهايد. قم بتصويب الخلايا باستخدام الأجسام المضادة للبروتين المضادة للمستهدف ذات العلامات الفلورية الحمراء والتي تربط على وجه التحديد البروتينات المستهدفة المعبر عنها وتضفي مضان أحمر إضافي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية