موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:02 دقيقة • July 8th, 2025
تعتبر تفاعلات البروتين والبروتين ضرورية للوظائف الخلوية الحيوية.
لدراسة التفاعلات بين بروتينات الغشاء - بروتينات الغشاء التي تمتد على طبقة ثنائية الدهون من غشاء الخلية ، ابدأ بآبار صفيحة متعددة الآبار تحتوي على ثقافة خلايا ثدييات ملتصقة.
بعد ذلك ، أضف محلولا يحتوي على عامل تعداء مناسب وزوج من بلازميدات التعبير.
يقوم أحد تعبير البلازميدات بتشفير بروتين عبر الغشاء ذي الأهمية مدمجا في الجزء الصغير غير الوظيفي من إنزيم لوسيفيراز ؛ يقوم البلازميد الآخر بتشفير بروتين غشائي ثان ذي أهمية مدمج في الجزء الكبير غير الوظيفي من إنزيم لوسيفيراز.
احتضان اللوحة. يسهل عامل التعدي الامتصاص الخلوي لبلازميدات التعبير.
تعبر الخلايا المنقولة بنجاح عن البروتينات عبر الغشاء. يؤدي التفاعل بين بروتينات الغشاء المعبر عنها إلى جلب الأجزاء الصغيرة والكبيرة التي تواجه السيتوبلازم على مقربة ، مما يجعلها ترتبط وتشكل إنزيم لوسيفيراز النشط.
استبدل الوسائط الموجودة في الآبار بوسائط خالية من المصل لتقليل تلألؤ الخلفية. أضف فوريمازين — محلول لوسيفيراز منفذ للخلية. يدخل فوريمازين إلى الخلايا ، وبعد ذلك يؤكسد لوسيفيراز الفوريمازين ، مما ينتج عنه تلألؤ عالي الكثافة.
باستخدام قارئ صفيحة دقيقة ، قم بقياس اللمعان ، مما يشير إلى التفاعل القوي بين بروتينات الغشاء.
احصد الملتصقة HEK293T زراعة الخلايا عن طريق التربسين ، وأعد تع
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية