موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 6:25 دقيقة • July 8th, 2025
للكشف الكمي عن بروتين معين في تحلل دماغ الفأر باستخدام التلألؤ الكيميائي الكهربائي ، يبدأ ECL ، المقايسة المناعية ، بلوحة فحص متعددة الآبار.
تشتمل الآبار على أقطاب كهربائية عاملة ومضادة ، وتكمل الدائرة الكهربائية. تفصل طبقة عازلة عن الأقطاب الكهربائية ، مما يحسن حساسية الفحص.
أضف الأجسام المضادة أحادية النسيلة الأولية للفأر ضد البروتين المستهدف إلى الآبار. تسهل الأقطاب الكهربائية العاملة ، ذات القدرة الأكبر على الربط ، الأجسام المضادة لتثبيت الجثث عليها.
احتضان بمحلول يحتوي على البروتين ، ويرتبط بأسطح الربط المتبقية للبئر ، مما يقلل من تداخل الخلفية.
أضف محللة الكسر النووي لدماغ الفأر. يرتبط البروتين المستهدف في المحللة على وجه التحديد بالأجسام المضادة وحيدة النسيلة.
أضف الأجسام المضادة متعددة النسيلة غير المسماة ، والتعرف على الحلقات الموجودة على البروتين والارتباط بها ، والتي ترتبط بالأجسام المضادة أحادية النسيلة الأولية على القطب. أضف أجساما مضادة ثانوية محددة تحمل علامة مركب الروثينيوم ، وترتبط بالأجسام المضادة غير المسماة. أضف عازلة مناسبة تحتوي على مادة خافضة للتوتر السطحي - توفر بيئة مناسبة لتوليد ECL - وثلاثي بروبأمين ، TPA.
ضع اللوحة متعددة الآبار في نظام الكشف عن ECL. عند تطبيق الجهد عبر الأقطاب الكهربائية ، يتأكسد مركب الروثينيوم المرتبط بالأجسام المضادة. في الوقت نفسه ،
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية