فحص Dot Blot لتحديد الجينوم الفيروسي
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 6:57 دقيقة • July 8th, 2025
لتحديد كمية الحمض النووي الفيروسي باستخدام مقايسة اللطخة النقطية ، ابدأ بتعليق الحمض النووي الفيروسي المعزول. عالج بمحلول قلوي لتغيير طبيعة الحمض النووي مزدوج الشريطة إلى خيوط مفردة للتهجين اللاحق.
قم بتجميع جهاز اللطخة النقطية بغشاء نايلون مبلل مسبقا. قم بتحميل الحمض النووي الفيروسي المشوه ومحاليل الحمض النووي البلازميد القياسية الخطية في الآبار. ضع فراغا مناسبا ، مما يسهل نقل الحمض النووي الفيروسي الفعال سالب الشحنة والارتباط بسطح الغشاء موجب الشحنة من خلال التفاعلات الكهروستاتيكية ، وتشكيل أنماط نقطية.
بعد التشغيل ، اغسل الغشاء بمحلول سترات الصوديوم ، مما يساعد على تحسين حساسية الفحص. بعد التجفيف ، قم بتعريض الغشاء للأشعة فوق البنفسجية ، وربط الحمض النووي الملطخ بالغشاء.
أضف جزءا من الحمض النووي غير متجانس بالحرارة وتعليق مسبار الحمض النووي المشع المسمى بالفوسفور الخاص بالجينوم الفيروسي في مخزن التهجين إلى الغشاء. احتضان وتسهيل التهجين.
تعمل شظايا الحمض النووي كعوامل مانعة ، وترتبط بمناطق الغشاء المتبقية ، مما يقلل من ارتباط المسبار غير المحدد. يهجن المسبار المشع مع التسلسل التكميلي على الحمض النووي الفيروسي أحادي الشريطة.
يغسل بمحلول غسيل لإزالة المجسات غير المهجنة. باستخدام نظام مسح الصور الفوسفورية ، حدد الإشارات المشعة المنبعثة من المجسات المشعة المهجنة إلى الجينوم الفيروسي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية