موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:39 دقيقة • July 8th, 2025
اللطخة النقطية الكمية - أو QDB - هي تقنية مفيدة لتحديد تركيز البروتينات المستهدفة في العينة. بمجرد تثبيت العينة على غشاء بوليمري ، يمكن اكتشاف البروتينات عن طريق النشاف المناعي.
للبدء ، خذ لوحة QDB - صفيحة متعددة الآبار مع غشاء نيتروسليلوز متصل بقاع كل بئر. أضف العينة — محللة الأنسجة التي تحتوي على البروتين المستهدف — في وسط الغشاء داخل البئر.
دع العينة تجف. يرتبط البروتين المستهدف بالغشاء عن طريق التفاعلات غير التساهمية.
أضف حجب الحظر. تلتصق البروتينات الموجودة في المحلول بالمواقع غير المرتبطة على الغشاء ، مما يمنع الارتباط غير المحدد لكواشف الكشف.
بعد ذلك ، أضف محلولا يحتوي على أجسام مضادة أولية ترتبط بالبروتين المستهدف في العينة. يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
ثم أضف محلول الأجسام المضادة الثانوية. ترتبط هذه الجزيئات - المسمى بإنزيم البيروكسيديز - بالأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالبروتين. يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أخيرا ، أضف محلولا يحتوي على ركيزة كيميائية وبيروكسيد الهيدروجين. باستخدام بيروكسيد الهيدروجين ، يؤكسد بيروكسيداز الأجسام المضادة الركيزة وينبعث منها الضوء. باستخدام قارئ اللوحة ، قم بقياس شدة تلألؤ العينة.
قم بإنشاء منحنى تلألؤ قياسي باستخدام تخفيف تسلسلي بتركيزات معروفة من البروتين المستهدف. ارسم قيمة التلألؤ المقاسة للعينة على المنحنى ل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية