النشاف الغربي الكمي لتقدير مستويات التعبير عن البروتين

يعد

النشاف الغربي الكمي - تقنية قائمة على تطبيع البروتين الكلي - مفيدا في تحديد مستويات التعبير عن البروتين المستهدفة.

للبدء ، قم بتحميل محللات الأنسجة في آبار هلام التدرج متعدد الأكريلاميد. يحتوي المحللة على البروتين المستهدف ، إلى جانب البروتينات الخلوية الأخرى.

قم بتشغيل الجل بجهد مناسب للفصل الكهربائي لبروتينات العينة على طول التدرج. عند الانتهاء ، ضع الجل فوق الغشاء البوليمري لمكود النقل.

ضع تيارا كهربائيا لنقل البروتينات المنفصلة إلى الغشاء. بعد ذلك ، ضع الغشاء في بقعة بروتين فلورية كاملة. ترتبط جزيئات الصبغة المشحونة في البقعة إلكتروستاتيكيا بجميع البروتينات الموجودة على الغشاء.

أضف حجب الحظر. وبالتالي ترتبط البروتينات الموجودة في المحلول بالغشاء. منع الارتباط غير المحدد لكواشف الكشف. أضف جسما مضادا أساسيا مرتبطا بالبروتين المستهدف فقط. بعد ذلك، أضف جسما مضادا ثانويا — مسمى بالفلوروفور — يرتبط بالجسم المضاد الأساسي.

إثارة العينة بالليزر. سجل التألق المنبعث من جزيئات الصبغة لصبغة البروتين الكلية والفلوروفورات المرتبطة بالأجسام المضادة بأطوال موجية مقابلة.

لحساب قيمة تحميل البروتين الطبيعي ، اقسم إجمالي إشارة البروتين لكل حارة على أعلى قيمة. اقسم إشارة البروتين المستهدف على قيمة التحميل الطبيعية المقابلة لتحديد التعبير النسبي للبروتين المستهدف.

بالنسبة للرحلان الكهربائي ، قم ب