النشاف الجنوبي للكشف عن إعادة التركيب المتماثل في جينوم الخلايا الجذعية الجنينية للفأر

يتضمن النشاف الجنوبي تحديد تسلسلات محددة من الحمض النووي من مزيج معقد من الحمض النووي عبر الكشف القائم على المسبار.

لتحديد إعادة التركيب المتماثل أو أحداث الموارد البشرية في الخلايا الجذعية الجنينية للفأر مع النشاف الجنوبي ، احصل على الحمض النووي الجيني من الخلايا. احتضان باستخدام إنزيم تقييد لهضم الحمض النووي إلى أجزاء أصغر.

قم بتحميل الحمض النووي على هلام الاغاروز. إجراء الرحلان الكهربائي لفصل الشظايا على أساس الحجم.

عالج الجل بمحلول حمضي لإزالة قواعد البيورين ، وتخفيف الحمض النووي المزدوج الشريطة ، dsDNA. أضف محلول تغيير طبيعة القلوية. يؤدي ارتفاع درجة الحموضة إلى تعطيل الروابط الهيدروجينية ، مما يؤدي إلى تغيير طبيعة dsDNA المخفف إلى DNA أحادي الشريطة ، ssDNA. احتضن بمحلول محايد لتحييد درجة الحموضة الجلمية.

قم بتجميع نظام النقل باستخدام أوراق النشاف وغشاء النايلون والهلام المكدس أعلى الغشاء. قم بإجراء النقل. ينتقل ssDNA من الجل إلى الغشاء عن طريق العمل الشعري لأسفل.

تشعيع الغشاء بالأشعة فوق البنفسجية ، والربط المتبادل وتثبيت الحمض النووي. ضع الغشاء في أنبوب يحتوي على محلول تهجين. احتضان مع الدوران ، وطلاء الغشاء ومنع ربط المسبار غير المحدد.

أخيرا ، احتضان الغشاء بمخزن التهجين الذي يحتوي على مجسات أحادية الشريطة مصنفة إشعاعيا. ترتبط المجسات بمناطق محددة من الحمض النووي عبر تكامل