موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 8:51 دقيقة • July 8th, 2025
MicroRNAs ، miRNAs ، هي RNAs صغيرة ، أحادية الشريطة ، غير مشفرة. يندمج miRNA في مركب متعدد البروتينات ويرتبط بشكل أكبر بتسلسلات mRNA المستهدفة التكميلية لتنظيم التعبير الجيني سلبا.
للكشف عن miRNA معين من إجمالي الحمض النووي الريبي من الأنسجة النباتية ، أضف صبغة محملة بالهلام تحتوي على أصباغ تتبع وفورماميد - عامل تغيير طبيعة الحمض النووي الريبي. قم بتسخين العينة لتشويه طبيعة الحمض النووي الريبي ومنع تكوين الهيكل الثانوي قبل الرحلان الكهربائي.
قم بتحميل العينة وعلامات الحمض النووي الريبي القياسية في آبار من هلام بولي أكريلاميد متغير الطبيعة المجمع مسبقا. قم بتشغيل الرحلان الكهربائي ، مما يسهل الفصل القائم على الحجم لشظايا الحمض النووي الريبي.
انقل الجل إلى أوراق ترشيح مبللة مسبقا على علبة نشاف كهربائي. قم بمحاذاة غشاء نشاف النايلون المنقوع بالعازلة فوق الجل. ثم قم بتكديس أوراق الترشيح المبللة مسبقا. إجراء النشاف الكهربائي.
يتسبب التيار الكهربائي في خروج الحمض النووي الريبي سالب الشحنة ، بما في ذلك miRNA ، من الجل إلى سطح غشاء النايلون موجب الشحنة. تعريض الغشاء للأشعة فوق البنفسجية. هذا يربط الحمض النووي الريبي بالغشاء ، وبالتالي يمنع فقدان الحمض النووي الريبي.
احتضان الغشاء في مخزن مؤقت للتهجين يحتوي على عوامل مانعة تشغل مواقع الربط غير المحددة لتقليل ضوضاء الخلفية.
أضف مسبار قليل ال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية