تصوير FLIM-FRET لتوصيف تفاعلات البروتين والبروتين في البكتيريا الحية
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:26 دقيقة • July 8th, 2025
لدراسة تفاعلات معينة بين البروتين والبروتين في البكتيريا الحية باستخدام الفحص المجهري للتصوير مدى الحياة الفلورية ، يبدأ FLIM ، جنبا إلى جنب مع نقل طاقة رنين Förster ، FRET ، بتعليق بكتيري مؤتلف. تعبر البكتيريا عن بروتينات سيتوبلازمية محددة تشارك في مسارات التمثيل الغذائي ، وتسمى بروتينات الفلورسنت المانحة والمتقبلة المناسبة ل FRET.
اكتشف المعلق البكتيري على وسادة الاغاروز ، مما يشل حركة البكتيريا على شريحة مجهرية. ضع غطاء على الشريحة وختمها.
ضع الشريحة على مسرح مجهر المسح الضوئي المقلوب للإثارة ثنائية الفوتون للفحص المجهري FLIM-FRET. استخدم مصباح مضان لتحديد ومسح منطقة ذات أهمية على الطبقة الأحادية البكتيرية.
يؤدي التفاعل بين البروتينات السيتوبلازمية المعبر عنها إلى تقريب بروتينات الفلورسنت المانحة والمتلقية في الاتجاه المناسب. عند إضاءة الليزر بطول موجي مناسب ، يصبح البروتين الفلوري المانح متحمسا.
يؤدي القرب الشديد من البروتينات الفلورية إلى تحفيز FRET ، مما يؤدي إلى نقل الطاقة غير الإشعاعية من بروتينات الفلورسنت المانحة إلى البروتينات الفلورية المتقبلة ، والتي تثير وتعود في النهاية إلى الحالة الأرضية ، وتنبعث منها مضانة.
يقللنقل الطاقة غير الإشعاعية من الوقت المستغرق لعودة البروتين الفلوري المتبرع المتحمس إلى حالته الأساسية ، وعمر مضان المتبرع - يقاس بواسطة FLIM. يؤكد الانخفاض
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية