مقايسة تجميع الخلايا للكشف عن التفاعلات العابرة بين جزيئات التصاق الخلايا

0 views • 4:16 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في الجهاز العصبي ، تشكل التفاعلات عبر الخلايا - التفاعلات بين جزيئات التصاق الخلايا المشبكية المحددة ، والبروتينات عبر الغشاء ، على الخلايا العصبية قبل المشبكية وما بعد المشبكي - مركبا في نقاط الاشتباك العصبي ، مما يتوسط في الإشارات عبر التشابك.

للكشف عن التفاعلات عبر الخلايا بين جزيئات التصاق الخلايا المشبكية المعبر عنها على خلايا الكلى الجنينية البشرية عبر مقايسة تجميع الخلايا ، ابدأ بمعلقات الخلايا المنقولة.

تعبر إحدى الخلايا المنقولة عن جزيء التصاق الخلية قبل المشبكية المطلوب والبروتين الفلوري الأخضر ؛ والآخر يعبر عن جزيء التصاق الخلية بعد المشبكي المحدد وبروتين الفلورسنت الأحمر. يتم أيضا الحصول على مجموعتين من الخلايا التي تعبر عن بروتينات الفلورسنت الخضراء والحمراء.

الطرد المركزي الخلايا. أعد تعليق الخلايا في وسائط مناسبة مكملة بأيونات الكالسيوم. امزج الخلايا المنقولة لكلا المجموعتين بالتساوي في أنبوب. كرر مع مجموعات الخلايا الأخرى.

أثناء الحضانة ، ترتبط أيونات الكالسيوم بموقع معين على البروتين قبل المشبكي المعبر عنه في مجموعة من الخلايا. هذا يزيد من تفاعل البروتين قبل المشبكي مع الترابط التالي المشبكي للخلايا الأخرى ، مما يسهل الارتباط ، ويتوسط في التصاق الخلايا غير المتجانسة بين هذه الخلايا ، ويؤدي إلى تراكم الخلايا.

تحت المجهر الفلوري ، قم بتصوير الخلايا باستخدام القنوات المناسبة ، وتصور التألق الأخضر والأحمر للخلايا. معالجة الصور.

لا يظهر أي تراكم في مجموعات الخلايا التي تعبر عن البروتينات الفلورية فقط. يتم تصور تراكم الخلايا على أنه أصفر بسبب التداخل بين الخلايا الفلورية الخضراء والحمراء التي تعبر عن جزيئات التصاق الخلية المشبكية ، مما يشير إلى تفاعلات عبر الخلايا بين الجزيئات.

بعد 48 ساعة من نقل الخلايا HEK293T ، قم بحصاد الخلايا من الصفيحة المكونة من 6 آبار للتجميع. أولا ، اغسل كل بئر مرتين باستخدام PBS. بعد ذلك ، لفصل الخلايا برفق ، أضف 1 مليلتر من 10 ملليمولار EDTA إلى كل بئر. ثم احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية.

بعد خمس دقائق من الحضانة ، اضغط برفق على اللوحة لفصل الخلايا ، وحصاد كل بئر في أنبوب مخروطي منفصل سعة 15 مل. الطرد المركزي الأنابيب عند 500 × جم في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.

أثناء تكوير الخلايا ، قم بإعداد ستة أنابيب حضانة عن طريق وضع العلامات على قمم أنابيب الطرد المركزي الدقيقة بالظروف التجريبية. يجب استخدام كل تبديل من GFP و mCherry .

قم بإزالة المواد الطافية من الأنابيب المخروطية سعة 15 مليلتر ، وأعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من المتوسط. باستخدام مقياس كثافة الدم ، عد الخلايا في كل أنبوب مخروطي. بعد ذلك ، قم بنقل 200,000 خلية من كل حالة إلى أنبوب الحضانة المناسب لمزيج فردي بحجم إجمالي يبلغ 500 ميكرولتر. ضع أنابيب الحضانة في دوار أنبوب بطيء في درجة حرارة الغرفة.

لتقييم التجميع ، عند خط الأساس ، ومرة أخرى بعد 60 دقيقة ، قم بإخراج 40 ميكرولترا من أنبوب الحضانة على شريحة مجهر مشحونة. يجب أن يتم اكتساب خط الأساس في أسرع وقت ممكن بعد إضافة الخلايا إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق.

قم بتصوير الشريحة تحت التألق في كل من القناتين الخضراء والحمراء. لكل شريحة، التقط صورا لثلاثة مجالات رؤية مختلفة في مستوى بؤري واحد.

10:44

تباين الخواص مضان كأداة لدراسة التفاعلات البروتين البروتين

Related Videos

0 Views

08:43

تحليل الطيفي تقلب Fluorescence من تفاعلات البروتين البروتين في الخلية جهات الاتصال

Related Videos

0 Views

10:25

مراقبة تفاعلات البروتين والرباط في الخلايا البشرية عن طريق الرنين المغناطيسي النووي الكمي داخل الخلية في الوقت الفعلي باستخدام مفاعل حيوي عالي الكثافة للخلايا

Related Videos

0 Views

13:22

التصاق الفحص عن التردد في الموقع تحليل حركية عبر صلي التفاعلات الجزيئية في خلية واجهة سيل

Related Videos

0 Views

04:25

فحص الالتصاق في المختبر للكشف عن التصاق الخلايا السرطانية بمصائد العدلات خارج الخلية

Related Videos

0 Views

09:14

ثابت التصاق الفحص لدراسة إنتغرين تنشيط الخلايا اللمفية تي في

Related Videos

0 Views

11:02

مقايسة الوظيفية للفجوة صلي فحص. Electroporation للمن الخلايا الملتصقة على الإنديوم أكسيد القصدير

Related Videos

0 Views

08:15

حبة تجميع فحوصات لتوصيف المزعومين خلية التصاق جزيئات

Related Videos

0 Views

07:40

فحص من التصاق تحت إجهاد القص لدراسة تي اللمفاويات-التصاق جزيء التفاعلات

Related Videos

0 Views

05:48

خلية "التجميع فحوصات" لتقييم ربط الشق المورفولوجية مع ترانس-يغاندس وتثبيط عن طريق رابطة الدول المستقلة-يغاندس

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026