مقايسة تجميع الخلايا للكشف عن التفاعلات العابرة بين جزيئات التصاق الخلايا

في الجهاز العصبي ، تشكل التفاعلات عبر الخلايا - التفاعلات بين جزيئات التصاق الخلايا المشبكية المحددة ، والبروتينات عبر الغشاء ، على الخلايا العصبية قبل المشبكية وما بعد المشبكي - مركبا في نقاط الاشتباك العصبي ، مما يتوسط في الإشارات عبر التشابك.

للكشف عن التفاعلات عبر الخلايا بين جزيئات التصاق الخلايا المشبكية المعبر عنها على خلايا الكلى الجنينية البشرية عبر مقايسة تجميع الخلايا ، ابدأ بمعلقات الخلايا المنقولة.

تعبر إحدى الخلايا المنقولة عن جزيء التصاق الخلية قبل المشبكية المطلوب والبروتين الفلوري الأخضر ؛ والآخر يعبر عن جزيء التصاق الخلية بعد المشبكي المحدد وبروتين الفلورسنت الأحمر. يتم أيضا الحصول على مجموعتين من الخلايا التي تعبر عن بروتينات الفلورسنت الخضراء والحمراء.

الطرد المركزي الخلايا. أعد تعليق الخلايا في وسائط مناسبة مكملة بأيونات الكالسيوم. امزج الخلايا المنقولة لكلا المجموعتين بالتساوي في أنبوب. كرر مع مجموعات الخلايا الأخرى.

أثناء الحضانة ، ترتبط أيونات الكالسيوم بموقع معين على البروتين قبل المشبكي المعبر عنه في مجموعة من الخلايا. هذا يزيد من تفاعل البروتين قبل المشبكي مع الترابط التالي المشبكي للخلايا الأخرى ، مما يسهل الارتباط ، ويتوسط في التصاق الخلايا غير المتجانسة بين هذه الخلايا ، ويؤدي إلى تراكم الخلايا.

تحت المجهر الفلوري ، قم بتصوير الخلايا باستخدام القنوات ا