مقايسة ربط القرب لدراسة تفاعلات البروتين والبروتين في الموقع

ابدأ مقايسة ربط القرب عن طريق أخذ الديدان الخيطية المقطعة وتثبيتها على شريحة مع تعرض خلايا السلالة الجرثومية الخاصة بها. تظهر هذه الخلايا مستويات عالية من مجمعات البروتين النووي الريبي التي تحتوي على بروتينات مرتبطة بالحمض النووي الريبي ، RBPs ، المرتبطة بالبروتينات الشريكة لها.

تراكب الشريحة بجسمين مضادين أساسيين يتعرفان على بروتينين مستهدفين محددين - RBP والبروتين الشريك له. استكمل الشريحة بنوعين من الأجسام المضادة الثانوية الخاصة بالأجسام المضادة الأولية الخاصة بها.

يتم اقتران كل جسم مضاد ثانوي مع مجسات PLA - خيوط الحمض النووي ذات التسلسلات التكميلية. ترتبط الأجسام المضادة الثانوية بالأجسام المضادة الأولية المرفقة مسبقا ، مما يجعل مجالس جيش التحرير الشعبى الصينى قريبا.

قم بتطبيق المخزن المؤقت للربط الذي يحتوي على قليل النوكليوتيدات الموصل - والتي تهجن مع مجسات PLA - ويقوم إنزيم الليغاز بسد الفجوة ، مما ينتج عنه DNA دائريا. احتضان الشريحة بمحلول تضخيم يحتوي على بوليميراز الحمض النووي و dNTPs ومجسات الكاشف المتصلة بالفلوروفور الأحمر.

باستخدام الحمض النووي الدائري كقالب ، يبدأ البوليميراز تضخيما للدائرة المتدحرجة ، مما يولد العديد من النسخ من قالب الحمض النووي المتصل ببعضه البعض. يظل الحمض النووي المضخم مربوطا بمسبار جيش التحرير الشعبى الصينى ، مما يتيح توطين تفاعل البروتين والبروت