التحليل الطيفي لتذبذب التألق لدراسة تفاعل البروتين في ملامسات الخلية

يمكن دراسة تفاعلات الخلية الخلوية - بوساطة البروتينات في أسطح الخلايا المجاورة - في الخلايا الحية باستخدام مقايسة التحليل الطيفي لتذبذب التألق.

أولا، خذ مزارع خلايا منفصلة تعبر عن مستقبل الالتصاق — بروتين عبر الغشاء. يتم تصنيف المستقبل الموجود في الخلايا من المجموعتين ببروتينات فلورية مفصولة طيفيا. توجد ملصقات الفلورسنت هذه على المنطقة السيتوبلازمية للمستقبل ، مما يمنع التداخل مع تفاعل الخلية الخلية.

تخلص من الوسيط وأضف التربسين ، مما يسهل انفصال الخلية. امزج مجموعتي الخلايا واحتضان ، مما يسمح لمستقبلات الخلايا المجاورة بتكوين تفاعلات متجانسة.

ضع الخلايا تحت مجهر متحد البؤر. قم بإضاءة العينة باستخدام مصادر الليزر ذات الأطوال الموجية المناسبة ، مما يتسبب في انبعاث من كلا الملصقين الفلوريين. حدد موقع خليتين متجاورتين بإشارات مضان مختلفة الألوان على اتصال.

احصل على مسح خطي - عموديا على منطقة أغشية الخلايا الملامسة - باستخدام القناة الطيفية لكل من الملصقات الفلورية. يركز الليزر على حجم صغير من العينة - حجم الكشف. عندما تنتشر المستقبلات ذات العلامات الفلورية داخل وخارج حجم الكشف ، تتقلب شدة التألق.

إذا لم تتفاعل مستقبلات الخلايا المجاورة ، فإنها تتحرك بشكل فردي ، مما يؤدي إلى تقلبات مستقلة في شدة التألق مع ارتباط متقاطع منخفض.

إذا تفاعلت الخلايا المجاورة الملامسة عبر مستقبلاتها ، فإن ال