طريقة قائمة على ELISA لتحليل التفاعلات بين بروتينات الطعم والفريسة
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:55 دقيقة • July 8th, 2025
يعدل التفاعل الفيزيائي بين شريكين بروتيني الآليات البيولوجية في اتجاه مجرى النهر.
للكشف عن تفاعلات البروتين والبروتين باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ، ELISA ، خذ لوحة مقايسة مناعية متعددة الآبار. أضف عازلة طلاء تحتوي على أحد البروتينات المتفاعلة - بروتين الطعم - واحتضنها. يتم امتصاص بروتينات الطعم على سطح البئر من خلال تفاعلات غير محددة كارهة للماء.
تخلص من المحلول المستهلك واغسل الطبق بمخزن مؤقت لإزالة البروتينات غير المرتبطة. أضف محلول حجب واحتضان ، مما يسمح لجزيئات عامل حجب المحلول بمنع مواقع الارتباط غير المحددة على سطح البئر.
أضف شريك البروتين المتفاعل - بروتين الفريسة - الموسوم ببقايا الهيستيدين لسهولة القياس الكمي. احتضان ، مما يسمح لبروتين الفريسة بالارتباط على وجه التحديد بشريكه التفاعلي - الطعم. أضف محلولا من الأجسام المضادة للهيستيدين المقترنة بإنزيمات بيروكسيداز الفجل الحار التي ترتبط بالفريسة ، وتشكل مركبا للطعم والفريسة والأجسام المضادة.
الماصة محلول يحتوي على ركيزة الإنزيم وبيروكسيد الهيدروجين وتحتضن.
يستخدمإنزيم بيروكسيداز الفجل بيروكسيداز الهيدروجين للأكسدة التحفيزية لركيزته - لتشكيل منتج أزرق اللون. أضف محلولا حمضيا يفسد طبيعة الإنزيم لإيقاف التفاعل ، مكونا ناتج تفاعل أصفر.
باستخدام قارئ صفيحة دقيقة ، قم بقياس كثافة لون المنتج ، والتي تتناسب مع ك
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية