موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:43 دقيقة • July 8th, 2025
لبدء فحص المستشعر الحيوي الموصلي المستند إلى β-lactamase ، خذ شريحة محول مع أقطاب كهربائية عاملة وعدادة ومرجعية. يحتوي القطب الكهربائي العامل على طلاء بوليمر موصل ، مما يسهل تثبيت المستضد المستهدف. تفتقر الأقطاب الكهربائية المرجعية والمضادة إلى طلاء البوليمر هذا.
أضف محلولا يحتوي على المستضد المستهدف على الشريحة. حضن. يتم تثبيت المستضد على سطح القطب الكهربائي العامل عن طريق التفاعلات غير التساهمية. يغسل لإزالة المستضدات غير المرتبطة.
أضف حجب الحظر. تلتصق البروتينات الموجودة في المحلول بالمواقع غير المنضمة على القطب الكهربائي العامل وتمنعها.
أضف بروتين خيميري ثنائي الوظيفة إلى الرقاقة للكشف عن المستضد الثابت. يتكون البروتين الخيمري من إنزيم β-lactamase — وهو بروتين بكتيري مسؤول عن مقاومة المضادات الحيوية. يتم دمج الإنزيم في جسم نانوي - المنطقة المتغيرة الطرفية N للأجسام المضادة أحادية المجال.
عند الحضانة ، يرتبط الجسم النانوي للبروتين بالمستضد المستهدف الثابت. يغسل لإزالة البروتينات الخيميرية غير المقيدة.
قم بتوصيل الشريحة بمقياس رقمي متعدد يتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر. أضف محلول كشف يحتوي على المضاد الحيوي بنزيل البنسلين — وهو ركيزة ل β-لاكتامايز.
يرتبط البنزيل بنسلين ب β-lactamase للبروتين الخيمري المرتبط بالمستضد ويتم تحلله بالماء - مما يتسبب في إطلاق البروتونات. تحفز البروتونات تغييرا في التوصيل الكهربائي للبوليمر.
ارسم الفرق في الوقت الفعلي في الموصلية بين القطب المرجعي والقطب الكهربائي العامل مع المستضد المستهدف الثابت ، مما يؤكد تفاعله مع البروتين الخيمري.
لبدء فحص المستشعر الحيوي الموصلي المستند إلى β-lactamase ، خذ شريحة محول مع أقطاب كهربائية عاملة وعدادة ومرجعية. يحتوي القطب الكهربائي العامل على طلاء بوليمر موصل ، مما يسهل تثبيت المستضد المستهدف. تفتقر الأقطاب الكهربائية المرجعية والمضادة إلى طلاء البوليمر هذا.
أضف محلولا يحتوي على المستضد المستهدف على الشريحة. حضن. يتم تثبيت المستضد على سطح القطب الكهربائي العامل عن طريق التفاعلات غير التساهمية. يغسل لإزالة المستضدات غير المرتبطة.
أضف حجب الحظر. تلتصق البروتينات الموجودة في المحلول بالمواقع غير المنضمة على القطب الكهربائي العامل وتمنعها.
أضف بروتين خيميري ثنائي الوظيفة إلى الرقاقة للكشف عن المستضد الثابت. يتكون البروتين الخيمري من إنزيم β-lactamase — وهو بروتين بكتيري مسؤول عن مقاومة المضادات الحيوية. يتم دمج الإنزيم في جسم نانوي - المنطقة المتغيرة الطرفية N للأجسام المضادة أحادية المجال.
عند الحضانة ، يرتبط الجسم النانوي للبروتين بالمستضد المستهدف الثابت. يغسل لإزالة البروتينات الخيميرية غير المقيدة.
قم بتوصيل الشريحة بمقياس رقمي متعدد يتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر. أضف محلول كشف يحتوي على المضاد الحيوي بنزيل البنسلين — وهو ركيزة ل β-لاكتامايز.
يرتبط البنزيل بنسلين ب β-lactamase للبروتين الخيمري المرتبط بالمستضد ويتم تحلله بالماء - مما يتسبب في إطلاق البروتونات. تحفز البروتونات تغييرا في التوصيل الكهربائي للبوليمر.
ارسم الفرق في الوقت الفعلي في الموصلية بين القطب المرجعي والقطب الكهربائي العامل مع المستضد المستهدف الثابت ، مما يؤكد تفاعله مع البروتين الخيمري.