موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 6:15 دقيقة • July 8th, 2025
في الخلايا ، ترتبط البروتينات ببروتيناتها المتفاعلة عبر تسلسلات محددة في بنيتها - مما يؤدي إلى تعديل عمل البروتين داخل الخلايا.
للكشف عن تفاعلات البروتين داخل الخلايا ، خذ مزرعة خلوية ملتصقة. استنشق الوسط.
أضف الببتيد المخترق للخلايا الحيوية ، ومحلول BCPP ، واحتضانه.
يحتويكل BCPP على تسلسل ببتيد يساعد في الارتباط المحدد بالبروتين داخل الخلايا المستهدف. يحتوي الببتيد على ببتيد مخترق للخلية ، CPP ، في الطرف N للببتيد والبيوتين في الطرف C لسهولة اكتشافه.
أثناء الحضانة ، تسهل منطقة CPP موجبة الشحنة دخول الببتيد المرتبط عبر غشاء الخلية ، والوصول إلى السيتوبلازم. يرتبط الببتيد بشريكه البروتيني المتفاعل داخل الخلايا - مكونا مركب بروتين مستهدف BCPP.
أضف عازلة تحتوي على جزيئات المنظفات التي تمزق غشاء الخلية وتطلق مجمعات البروتين المستهدفة BCPP والمكونات الخلوية الأخرى.
أضف محلولا من أفيدين المرتبط بحبة الاغاروز - وهو بروتين سكري يرتبط على وجه التحديد بالبيوتين في BCPPs. احتضان ، مما يسمح بارتباط أفيدين الذي لا رجعة فيه بالبيوتين وتنقية مجمعات البروتين المستهدفة من أفيدين-BCPP.
جهاز طرد مركزي لحبيبات الخرز. أعد تعليق الخرزات في مخزن مؤقت لشق الروابط غير التساهمية بين البروتينات ومجمعات بروتين الببتيد CPP من حبات البيوتين أفيدين.
تحليل مجمعات بروتين الببتيد CPP عن طريق النشاف الغربي. يشير نط
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية