مقايسة تنقية التقارب الترادفي لدراسة تفاعلات البروتين والبروتين
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 6:34 دقيقة • July 8th, 2025
تنقية التقارب الترادفي هو مخطط تنقية متسلسل لعزل مجمعات البروتين عن الخلايا لدراسة تفاعلات البروتين والبروتين.
للبدء ، خذ ثقافة خلية تعبر عن البروتينات ذات العلامات الهاتمة ذات الأهمية. تشكل البروتينات مركبا داخل الخلية. يحتوي أحد البروتينات الموجودة في المجمع على علامة Strep ، بينما يتم تصنيف الآخر بعلامة FLAG. هذه هي علامات التقارب الصغيرة القائمة على تسلسل الببتيد الاصطناعي.
قم بإزالة الوسط وأضف محلول منظف لتحلل الخلايا. جهاز طرد مركزي لإزالة الحطام الخلوي. اجمع المادة الطافية التي تحتوي على مركب البروتين المستهدف والبروتينات الخلوية الأخرى.
أضف حبات البكتيريا العقدية - حبات الاغاروز المغلفة بالستربتافيدين - واحتضنها. ترتبط علامة البكتيريا العقدية لمركب البروتين بالستربتافيدين. جهاز طرد مركزي لجمع الخرز المركب للبروتين. يغسل لإزالة أي بروتينات خلوية ملوثة.
أضف المخزن المؤقت للشطف الذي يحتوي على ديسثيوبيوتين - مشتق من البيوتين - والذي يحل محل مركب البروتين عن طريق الارتباط التنافسي بالستربتافيدين. جهاز طرد مركزي للحصول على مادة طافية تحتوي على مركب البروتين المملوء.
أضف حبات FLAG - حبات الاغاروز المغلفة بالأجسام المضادة ل FLAG - واحتضنها. ترتبط علامة FLAG لمركب البروتين بالجسم المضاد. جهاز طرد مركزي لجمع الخرز المركب للبروتين.
أضف المخزن المؤقت للشطف الذي يحتوي على ببتيد FLAG الم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية