JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 6:05 د • July 8th, 2025
الرنين المغناطيسي النووي ، أو الرنين المغناطيسي النووي ، التحليل الطيفي اكتشاف تفاعل البروتين والبروتين على المستوى الذري.
لدراسة التفاعلات بين البروتينات الكروية والحلزونية ، قم بتسمية البروتينات الكروية المنقاة من النوع البري أو الطافرة ب 15نيوتن - نظير النيتروجين. في أنبوب الرنين المغناطيسي النووي ، امزج البروتينات الحلزونية الكروية وغير المسماة في مذيب يحتوي على معيار الرنين المغناطيسي النووي. أدخل الأنبوب في مطياف الرنين المغناطيسي النووي.
يولد مغناطيس مقياس الطيف مجالا مغناطيسيا قويا ، حيث يقوم بمحاذاة 15نواة بروتين كروية تحمل علامة N بالتوازي مع المجال. يثير التردد الراديوي ، أو التردد اللاسلكي ، النواة 15N لمحاذاة عكس التوازي مع المجال.
يحدد تردد النبضة المطلوب لانتقال 15نيوتن نوى بين الحالتين تردد الرنين. تقيس تطبيع تردد الرنين 15نيوتن إلى معيار الرنين المغناطيسي النووي التحول الكيميائي 15N.
يتم ضبط المجال المغناطيسي لمحاذاة 1نوى H - المرتبطة ب 15نيوتن - بالتوازي مع المجال. يتم ضبط نبضات التردد اللاسلكي ، ويتم تسجيل التحول الكيميائي 1H.
أثناء تفاعلات البروتين ، تتغير البيئة الكيميائية المحيطة ببقايا الأحماض الأمينية المتفاعلة ، مما يؤدي إلى تغيير الروابط الكيميائية 15 N-1H والتحولات الكيميائية المقابلة. ارسم أطياف الرنين المغناطيسي النووي 15 N-1H.
بدون بروتينات حلزونية ، تظهر البروتينات الكروية من النوع البري قمما طيفية جيدة الحل. عندما تتفاعل البروتينات الكروية الحلزونية والبرية ، يتم تقليل الذروة الطيفية. في المقابل ، يؤدي احتضان البروتينات الحلزونية بالبروتينات الكروية الطافرة إلى ظهور القمم الطيفية مرة أخرى ، مما يشير إلى عدم وجود تفاعل بينها.
قم بتشغيل تدفق الهواء باستخدام الأمر إخراج "ej". سيؤدي ذلك إلى رفع العينة من المغناطيس. الآن ، ضع العينة داخل دوار أعلى المغناطيس في الفتحة. أدرج بالأمر "ij". انتظر حتى تستقر العينة داخل المغناطيس قبل المتابعة.
قم بإنشاء مجموعة بيانات جديدة باستخدام الأمر "edc" ، وقم بتحميل معلمات الرنين المغناطيسي النووي للبروتون القياسية عن طريق تحديد التجربة "ZGPR". املأ حقول الاسم ورقم التجربة ورقم مجلد البيانات المعالجة.
حدد المذيب في حقل "تعيين المذيب" وانقر على "تنفيذ" getprosol "لقراءة رأس المسبار القياسي والمعلمات المعتمدة على المذيبات. قم بقفل العينة في المذيب المنزوع باستخدام الأمر "قفل" ، وانتظر حتى تنتهي من الكنس وتحقق القفل.
قم بتصحيح تردد الرنين للمغناطيس عن طريق ضبط العينة باستخدام أمر الضبط التلقائي "atma". راقب منحنى التذبذب حتى يكتمل الضبط التلقائي.
قم بتقطيع المجال المغناطيسي باستخدام "TOPSHIM". يقوم Shimming بإجراء تعديل على المجال المغناطيسي لتحقيق التوحيد حول العينة. من الممارسات الجيدة تخزين نفس القيم باستخدام الأمر "wsh" وقراءتها باستخدام "rsh" قبل topshim إذا كنت تستخدم نفس العينات أو عينات مماثلة.
الآن ، اضبط كسب جهاز الاستقبال باستخدام الأمر "rga" لتحقيق أقصى نسبة إشارة إلى ضوضاء. ضع مركز الطيف على إزاحة رنين الماء واضبط نبضة البروتون 90 درجة على طاقة عالية باستخدام "calibo1p1".
اجمع طيف البروتون باستخدام الأمر Zero Go "zg" وقم بمعالجته باستخدام "efp". يتضمن ذلك الضرب الأسي ، واضمحلال الحث الحر الذي يتضمن توسيع الخط ، وتحويل فورييه ل FID ، و "pk" لتطبيق تصحيح الطور.
قم بتطبيق تصحيح الطور التلقائي "apk" والتصحيح الأساسي التلقائي "absn" باستخدام خيار كثيرات الحدود بدون تكامل. قم بإنشاء مجموعة بيانات جديدة لتجربة SOFAST HMBC عن طريق تحديد "SFHMQC3GPPH" في التجربة.
انسخ P1 و O1 المحسنين من طيف البروتون وقم بملء النبضات المعتمدة على P1 باستخدام الأمر "getprosol 1H p1 plw1" حيث P1 هي قيمة P1 المحسنة و plw1 هو مستوى القدرة ل P1. الآن ، قم بتحسين ثابت CNST54 لتعيين الإزاحة للتحول الكيميائي للأميد. أيضا ، قم بتحسين CNST55 لتحديد النطاق الترددي ليشمل المناطق الطيفية ذات الأهمية ، مما يسمح بتحسين كسب المستقبل.
لتحديد هذه المعلمات ، استخرج أول FID من الطيف ثنائي الأبعاد ، وابحث عن الإشارة المرصودة لتحديدها. بالإضافة إلى ذلك ، قم بتغيير تأخير الاسترخاء وعدد عمليات المسح وعمليات المسح الوهمية للحصول على حساسية إشارة مقبولة باستخدام الأمر "gs" ، والذي يتيح الانتقال والمسح الضوئي لمراقبة جودة البيانات في الوقت الفعلي. أخيرا ، سجل الأطياف باستخدام Zero Go "zg".