مقايسة تحول الحركة الكهربية للكشف عن مجمعات عامل النسخ - الحمض النووي
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:31 دقيقة • July 8th, 2025
تتعرف البروتينات التنظيمية ، مثل عوامل النسخ ، على تسلسل الحمض النووي المحدد وترتبط به في مناطق المحفز ، وتنظم التعبير الجيني.
للكشف عن تفاعلات عامل النسخ والحمض النووي المحددة باستخدام مقايسة تحول الحركة الكهربية ، ابدأ بأنبوب يحتوي على عامل النسخ المطلوب ومجسات DNA قصيرة محددة ، بالأشعة تحت الحمراء ، وصبغة الفلورسنت في مخزن مؤقت ملزم. احتضن في الظلام ، ومنع التبييض الضوئي للصبغة.
توفر القوة الأيونية ودرجة الحموضة للمخزن المؤقت ظروفا مناسبة لعامل النسخ لتحديد وربط تسلسلات ربط محددة على مسبار الحمض النووي. تعمل أيونات المغنيسيوم الموجودة في المخزن المؤقت على استقرار مجمعات البروتين والحمض النووي.
أضف صبغة تحميل مناسبة إلى الخليط ، مما يساعد على تصور تطور الرحلان الكهربائي. قم بتحميل هذا الخليط ومجسات الحمض النووي في آبار جل بولي أكريلاميد مسبقة الصب وغير متغير الطبيعة.
إجراء الرحلان الكهربائي في الظلام.
يتسبب المجال الكهربائي المطبق في انخفاض الوزن الجزيئي ، ومجسات الحمض النووي غير المنضمة ، والسالبة الشحنة للتحرك عبر الهلام نحو الأنودات الموجبة الشحنة. ومع ذلك ، فإن مجمعات مسبار البروتين والحمض النووي الكبيرة - ذات الوزن الجزيئي الأعلى - تهاجر ببطء ، مما يؤدي إلى تأخر الهجرة والتحول في حركة الحمض النووي في الجل.
بعد الرحلان الكهربائي ، قم بمسح الجل باستخدام نظام التصوير بالأشعة تح
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية