موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 7:05 دقيقة • July 8th, 2025
لتحديد مواقع الارتباط للبروتين المستهدف على الحمض النووي ، ابدأ بخلايا سلائف الخلايا قليلة التغصن التي تحتوي على بروتين مستهدف مرتبط بتسلسلات محددة من الحمض النووي في الكروماتين.
عالج الخلايا بمحلول تحلل يحتوي على مثبطات الإنزيم البروتيني. يعمل المخزن المؤقت للتحلل على تحلل الخلايا ، بينما تقوم المثبطات بتعطيل البروتياز للاحتفاظ بسلامة مجمعات البروتين والكروماتين.
قم بتقطيع المحتوى لقص المجمعات إلى أجزاء كروماتين أصغر ، مع الاحتفاظ ببعضها بالبروتين المستهدف.
جهاز طرد مركزي لحبيبات مكونات الخلية ، ونقل المادة الطافية التي تحتوي على شظايا الكروماتين إلى أنبوب جديد. احتضان بالأجسام المضادة المستهدفة التي ترتبط على وجه التحديد بالبروتين المستهدف على شظايا الكروماتين.
استكمل الأنبوب بخرز مغناطيسي مغلف بالبروتين A يرتبط بمنطقة Fc من الأجسام المضادة المرتبطة مسبقا. تطبيق مجال مغناطيسي لترسيب البروتينات المستهدفة المرتبطة بالأجسام المضادة بشكل انتقائي مع شظايا الكروماتين.
عالج مجمعات الخرز بمحلول شطف يحتوي على نسبة عالية من الملح لتعطيل تفاعلات البروتين والكروماتين وإطلاق الحمض النووي العاري بدون بروتينات مرتبطة بها.
استخدم المذيبات العضوية لاستخراج الحمض النووي. أضف مخزن مؤقت للتضخيم ، وقم بتشغيل تفاعل متسلسل للبوليميراز لتضخيم شظايا الحمض النووي. بعد التضخيم ، تحليل تسلسل الحمض النووي.
ق
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية