تباين الخواص الفلورية لتحديد تقارب ربط عامل النسخ والحمض النووي

عامل النسخ ، TF ، هو بروتين يرتبط بمنطقة الحمض النووي المحددة للجين وينظم النسخ.

لقياس تفاعلات TF-DNA عن طريق تباين الخواص الفلورية ، خذ صفيحة متعددة الآبار. أضف الجل المنصهر الممزوج بمحلول مخزن ، يحتوي على تركيزات معروفة من الحمض النووي المرجعي الموسوم بالفلوروفور والذي يشتمل على موقع ربط TF وتركيز أعلى من جزيئات TF ، إلى البئر واحتضانه.

نظرا لأن الحمض النووي المرجعي المسمى يوزع في الهلام ، فإن تركيز جزيء TF الأعلى يضمن أن جميع جزيئات الحمض النووي مرتبطة ب TF. أضف محلولا مخزنة يحتوي على الحمض النووي المنافس غير المسمى مع طفرة أحادية النقطة.

قم بتحليل هلام اللوحة باستخدام الفحص المجهري التباين الفلوري عالي الأداء.

يثير الضوء المستقطب الفلوروفور المرجعي المرتبط بالحمض النووي ، والذي يعيد توجيهه بسبب الهبوط الجزيئي وينبعث منه ضوء متعدد الاتجاهات غير المستقطب - وهي ظاهرة تسمى تباين التألق ، FA.

عند الارتباط ب TF ، يزداد الوزن الجزيئي للفلوروفور المرجعي المرتبط بالحمض النووي ويتراجع بشكل أبطأ ، مما ينبعث منه المزيد من الضوء المستقطب الذي يزيد من FA.

ينتشر الحمض النووي المنافس غير المسمى عبر مصفوفة الهلام بمرور الوقت ، مكونا تدرجا تركيزا مرتفعا إلى منخفضا. يزيح تركيز الحمض النووي المنافس الأعلى غير المسمى الحمض النووي المرجعي المسمى ، ويرتبط ب TF. تتعثر أوليغومرات المرجعية المسماة التي